| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 苹果病害 | 第12-13页 |
| 1.1.1 病害类型 | 第12页 |
| 1.1.2 我国苹果病害现状 | 第12-13页 |
| 1.1.3 苹果真菌病害防治 | 第13页 |
| 1.2 几丁质 | 第13-14页 |
| 1.3 几丁质酶 | 第14-18页 |
| 1.3.1 几丁质酶的特性 | 第14页 |
| 1.3.2 几丁质酶的结构及其功能 | 第14-15页 |
| 1.3.3 几丁质酶的分类 | 第15-17页 |
| 1.3.4 几丁质酶生物学作用 | 第17-18页 |
| 1.4 植物几丁质酶基因 | 第18-20页 |
| 1.4.1 植物几丁质酶基因结构 | 第18-19页 |
| 1.4.2 植物几丁质酶基因工程研究进展 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-34页 |
| 2.1 试验与材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂和试验仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第21-22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 核酸提取与检测 | 第22-23页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.3 RNA的反转录 | 第24页 |
| 2.2.4 基因克隆 | 第24-25页 |
| 2.2.5 目的片段的回收与重组连接 | 第25页 |
| 2.2.6 重组质粒DNA的转化、鉴定及测序 | 第25-26页 |
| 2.2.7 序列分析 | 第26页 |
| 2.3 过表达载体的构建 | 第26-28页 |
| 2.3.1 质粒提取 | 第26-27页 |
| 2.3.2 目的片段与pRI 101 AN载体连接 | 第27页 |
| 2.3.3 重组质粒DNA的转化、鉴定及测序 | 第27-28页 |
| 2.4 农杆菌介导转化拟南芥和苹果 | 第28-31页 |
| 2.4.1 农杆菌感受态的制备 | 第28-29页 |
| 2.4.2 质粒转化农杆菌 | 第29页 |
| 2.4.3 农杆菌转化苹果 | 第29-30页 |
| 2.4.4 农杆菌侵染拟南芥 | 第30-31页 |
| 2.5 转化植株检测 | 第31-32页 |
| 2.5.1 PCR鉴定 | 第31页 |
| 2.5.2 转化植株离体叶片再生鉴定 | 第31页 |
| 2.5.3 qRT-PCR检测MdChi基因在转基因植株中的表达 | 第31-32页 |
| 2.6 转化植株抗病性检测 | 第32-34页 |
| 2.6.1 灰霉菌悬浮液的制备 | 第32页 |
| 2.6.2 病情指数调查 | 第32-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-49页 |
| 3.1 苹果MdChi基因的克隆与分析 | 第34-38页 |
| 3.1.1 总RNA的提取 | 第34页 |
| 3.1.2 PCR扩增苹果MdChi基因 | 第34-35页 |
| 3.1.3 菌液PCR扩增 | 第35页 |
| 3.1.4 苹果MdChi氨基酸序列 | 第35页 |
| 3.1.5 苹果MdChi氨基酸结构分析 | 第35-37页 |
| 3.1.6 同源性与系统发育分析 | 第37-38页 |
| 3.2 苹果MdChi基因过表达载体构建及转化农杆菌 | 第38-40页 |
| 3.2.1 酶切pRI 101 AN和pMD-MdChi载体 | 第38-39页 |
| 3.2.2 目的片段与载pRI 101 AN的连接 | 第39-40页 |
| 3.2.3 重组过表达载体的验证 | 第40页 |
| 3.3. 拟南芥遗传转化及转基因植株的鉴定 | 第40-43页 |
| 3.3.1 过表达载体转化农杆菌 | 第40-41页 |
| 3.3.2 拟南芥遗传转化 | 第41页 |
| 3.3.3 转基因拟南芥PCR鉴定 | 第41-43页 |
| 3.4 苹果遗传转化及转基因植株的鉴定 | 第43-46页 |
| 3.4.1 过表达载体转化农杆菌 | 第43页 |
| 3.4.2 苹果遗传转化 | 第43-44页 |
| 3.4.3 转基因苹果PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.4 卡那霉素抗性鉴定 | 第45页 |
| 3.4.5 转基因苹果植株中MdChi基因的表达分析 | 第45-46页 |
| 3.5 转基因植株抗病性检测 | 第46-49页 |
| 3.5.1 拟南芥转基因植株抗病性检测 | 第46-47页 |
| 3.5.2 苹果转基因植株抗病性检测 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 4.1 几丁质酶的结构 | 第49页 |
| 4.2 MdChi的生物学功能 | 第49-50页 |
| 4.3 MdChi诱导病程相关蛋白基因表达 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
