| 摘要 | 第2-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一部分 探讨血清维生素D水平与儿童哮喘关系 | 第13-36页 |
| 第1章 材料与方法 | 第13-17页 |
| 1.1 主要仪器 | 第13页 |
| 1.2 主要试剂 | 第13页 |
| 1.3 研究对象的选择和哮喘的诊断标准 | 第13-15页 |
| 1.3.1 对象 | 第13页 |
| 1.3.2 知情同意 | 第13页 |
| 1.3.3 哮喘的诊断标准 | 第13-14页 |
| 1.3.4 哮喘分期 | 第14页 |
| 1.3.5 哮喘严重程度分级 | 第14-15页 |
| 1.4 试验方法 | 第15-16页 |
| 1.4.1 受试者肺功能的测定 | 第15页 |
| 1.4.2 使用哮喘控制问卷(ACQ)进行病情评估 | 第15页 |
| 1.4.3 使用食物频次调查表调查饮食种类及频次 | 第15页 |
| 1.4.4 流式细胞检测 | 第15页 |
| 1.4.5 25-（OH）D浓度的测量 | 第15-16页 |
| 1.4.6 计算 | 第16页 |
| 1.5 统计方法 | 第16-17页 |
| 第2章 实验结果 | 第17-22页 |
| 2.1 哮喘组与对照组的一般情况（ | 第17页 |
| 2.2 哮喘组和对照组血清维生素 D 水平分布数据 | 第17-18页 |
| 2.3 病例组平均维生素 D 水平 20.84±6.80ng/ml,健康对照组平均维生素 D水平 28.83±6.69ng/ml；可见病例组维生素 D 水平和健康对照组相比明显降低(t=44.875, P<0.001) | 第18页 |
| 2.4 病例组与健康对照组不同季节维生素 D 水平比较 | 第18-19页 |
| 2.5 血清维生素D浓度与哮喘严重度的关联性 | 第19页 |
| 2.6 病例组肺功能和血清维生素 D 水平的关系 | 第19-20页 |
| 2.7 哮喘组和对照组免疫功能统计数据比较 | 第20页 |
| 2.8 哮喘严重度与细胞免疫的关系 | 第20-21页 |
| 2.9 哮喘组和对照组食物频次数据比较 | 第21-22页 |
| 第3章 讨论 | 第22-29页 |
| 3.1 维生素D与儿童哮喘的关系 | 第23-25页 |
| 3.2 哮喘儿童肺功能与维生素D之间的关系 | 第25-27页 |
| 3.3 维生素D与哮喘严重程度的关系 | 第27-29页 |
| 第4章 结论 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-36页 |
| 第二部分 探讨相关基因多态性与儿童哮喘的关系 | 第36-60页 |
| 第1章 材料和方法 | 第37-49页 |
| 1.1 主要仪器及耗材 | 第37页 |
| 1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 1.3 研究对象、哮喘诊断、严重度评估标准 | 第37-38页 |
| 1.3.1 对象 | 第37页 |
| 1.3.2 知情同意 | 第37-38页 |
| 1.3.3 哮喘的诊断标准 | 第38页 |
| 1.3.4 哮喘分期 | 第38页 |
| 1.4 哮喘严重程度分级 | 第38页 |
| 1.5 血样样本采集 | 第38页 |
| 1.6 基因型获得 | 第38-39页 |
| 1.6.1 DNA提取步骤 | 第38-39页 |
| 1.6.2 DNA浓度及纯度检测 | 第39页 |
| 1.6.3 总DNA浓度、纯度、完整性的检测 | 第39页 |
| 1.7 对于4个待检的SNP位点检测结果 | 第39-40页 |
| 1.8 设计与合成引物 | 第40页 |
| 1.9 实验流程与方法 | 第40-42页 |
| 1.9.1Sequenom实验流程说明 | 第40页 |
| 1.9.2 Sequenom实验操作步骤 | 第40-42页 |
| 1.10 引物稀释及注意事项 | 第42页 |
| 1.10.1 引物稀释 | 第42页 |
| 1.10.2 注意事项 | 第42页 |
| 1.11 Sequenom MassArray系统基因分型步骤 | 第42-48页 |
| 1.11.1 PCR扩增反应 | 第42-44页 |
| 1.11.2 延伸反应 | 第44-45页 |
| 1.11.3 完成去盐，导入 Assay 中，样本表格输入，建板，点样，Mass ARRAY 分析，质量控制及输出报告等实验工作 | 第45-48页 |
| 1.12 统计学分析 | 第48-49页 |
| 1.12.1 等位基因频率和基因型频率计算 | 第48-49页 |
| 1.12.1.1 计算基因型的频率 | 第48页 |
| 1.12.1.2 检验Hardy-Weinberg平衡吻合度 | 第48页 |
| 1.12.1.3 基因型与等位基因分布差异统计学分析 | 第48页 |
| 1.12.1.4 等位基因与哮喘严重度的统计学分析 | 第48页 |
| 1.12.1.5 等位基因与哮喘组儿童肺功能的统计学分析 | 第48-49页 |
| 第2章 实验结果 | 第49-55页 |
| 2.1 一般资料分析 | 第49页 |
| 2.2 基因SNP位点引物序列 | 第49-50页 |
| 2.3 病例组与对照组相关基因 SNP 位点基因型与等位基因频率分布，rs1544410 位点基因型 GA 分布差异有统计学意义（χ2 =5．432，P<0.05,OR 值 1.870） | 第50-51页 |
| 2.4 两组的 SNPs 位点基因型检测值与预计值比较结果，分布均符合 Hardy—Weinberg 平衡 | 第51页 |
| 2.5 哮喘组等位基因与肺功能相关性统计学分析 | 第51-54页 |
| 2.6 哮喘组等位基因与严重度统计学分析 | 第54-55页 |
| 第3章 讨论 | 第55-57页 |
| 第4章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-60页 |
| 文献综述 | 第60-76页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第76-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
