| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-23页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 ALA的应用 | 第10-13页 |
| 1.2.1 ALA在农业中的应用 | 第10-12页 |
| 1.2.2 ALA在医药中的应用 | 第12-13页 |
| 1.3 ALA的生产方法 | 第13-18页 |
| 1.3.1 ALA的化学合成方法 | 第13-15页 |
| 1.3.2 ALA的生物合成 | 第15-18页 |
| 1.4 体外合成生物学的研究现状 | 第18-20页 |
| 1.4.1 体外多酶催化的优势 | 第18-19页 |
| 1.4.2 体外多酶催化的基本原理 | 第19页 |
| 1.4.3 体外合成中ATP平衡 | 第19-20页 |
| 1.5 ALAS的研究现状 | 第20-22页 |
| 1.5.1 ALAS的来源 | 第20-21页 |
| 1.5.2 ALAS的动力学分析 | 第21页 |
| 1.5.3 ALAS的热稳定性分析 | 第21-22页 |
| 1.6 本文的研究内容与技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 5-氨基乙酰丙酸合成酶的筛选、表达及分离纯化 | 第23-38页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.3 培养基和主要试剂 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.3.1 ALAS的筛选 | 第25-26页 |
| 2.3.2 ALAS的密码子优化以及全基因合成 | 第26页 |
| 2.3.3 ALAS的诱导表达 | 第26-27页 |
| 2.3.4 ALAS的分离纯化 | 第27页 |
| 2.3.5 蛋白纯度及浓度的测定 | 第27页 |
| 2.3.6 ALA标准曲线的制作 | 第27-28页 |
| 2.3.7 样品中ALA的测定 | 第28页 |
| 2.3.8 ALAS最适温度的测定 | 第28页 |
| 2.3.9 ALAS最适pH的测定 | 第28-29页 |
| 2.3.10 比活力的测定 | 第29页 |
| 2.3.11 Km的测定 | 第29页 |
| 2.3.12 酶的稳定性分析 | 第29页 |
| 2.4 结果和讨论 | 第29-36页 |
| 2.4.1 ALAS的筛选 | 第29-30页 |
| 2.4.2 酶的分离纯化 | 第30-31页 |
| 2.4.3 酶的最适温度 | 第31页 |
| 2.4.4 酶的最适pH | 第31-32页 |
| 2.4.5 酶动力学分析 | 第32-35页 |
| 2.4.6 酶的稳定性 | 第35-36页 |
| 2.5 小结 | 第36-38页 |
| 第三章 体外 5-氨基乙酰丙酸合成系统的建立 | 第38-57页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 实验材料 | 第38-40页 |
| 3.2.1 实验药品与试剂 | 第38-40页 |
| 3.2.2 主要仪器和设备 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-45页 |
| 3.3.1 重组质粒的构建 | 第40-42页 |
| 3.3.2 酶蛋白的诱导表达纯化 | 第42页 |
| 3.3.3 琥珀酰辅酶A合成酶酶活的测定 | 第42-43页 |
| 3.3.4 多聚磷酸激酶酶活的测定 | 第43-44页 |
| 3.3.5 不同底物浓度对琥珀酰辅酶A合成酶反应速率的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.6 不同底物浓度对多聚磷酸激酶反应速率的影响 | 第45页 |
| 3.3.7 酶的热稳定性分析 | 第45页 |
| 3.3.8 体外多酶催化合成ALA | 第45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-56页 |
| 3.4.1 体外多酶催化ALA合成途径的设计 | 第45-46页 |
| 3.4.2 目的片段的扩增 | 第46页 |
| 3.4.3 重组质粒的验证 | 第46-47页 |
| 3.4.4 蛋白的成功表达 | 第47-48页 |
| 3.4.5 琥珀酰辅酶A合成酶活性的检测 | 第48-49页 |
| 3.4.6 多聚磷酸激酶活性的检测 | 第49-50页 |
| 3.4.7 不同底物浓度对酶反应速率的影响 | 第50-52页 |
| 3.4.8 酶的热稳定性分析 | 第52-54页 |
| 3.4.9 体外多酶催化反应合成ALA | 第54-56页 |
| 3.5 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 结论和展望 | 第57-59页 |
| 4.1 结论 | 第57-58页 |
| 4.2 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 发表论文和参加科研情况 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
