| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| 1.1 干扰素简介 | 第10-12页 |
| 1.1.1 干扰素的分类 | 第10页 |
| 1.1.2 干扰素的来源及功能 | 第10-11页 |
| 1.1.3 干扰素研究现状 | 第11-12页 |
| 1.2 干扰素 γ | 第12-16页 |
| 1.2.1 干扰素 γ 结构 | 第12页 |
| 1.2.2 IFN-γ 受体 | 第12-13页 |
| 1.2.3 IFN-γ 功能 | 第13页 |
| 1.2.4 IFN-γ 作用机制 | 第13-14页 |
| 1.2.5 IFN-γ 研究进展 | 第14-16页 |
| 1.2.6 红鳍东方鲀IFN-γ 研究现状 | 第16页 |
| 1.3 几种鱼类免疫因子研究概述 | 第16-17页 |
| 1.3.1 Mx蛋白 | 第16-17页 |
| 1.3.2 TNF | 第17页 |
| 1.3.3 趋化因子 | 第17页 |
| 1.3.4 MHC | 第17页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.1 基因工程表达系统 | 第17-18页 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达系统研究概述 | 第18页 |
| 1.4.3 鱼类基因在毕赤酵母中的表达 | 第18-19页 |
| 1.5 鱼类转录组分析 | 第19-20页 |
| 1.5.1 转录组和RNA-seq | 第19-20页 |
| 1.5.2 RNA-seq在鱼类中的研究进展 | 第20页 |
| 1.6 本研究目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 红鳍东方鲀IFN-γ 真核表达及活性检测 | 第22-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌株与细胞 | 第22页 |
| 2.1.2 试剂及配方 | 第22-23页 |
| 2.1.3 仪器与设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 真核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.2 毕赤酵母感受态细胞制备 | 第24页 |
| 2.2.3 电转化 | 第24-25页 |
| 2.2.4 高拷贝菌株的筛选 | 第25页 |
| 2.2.5 毕赤酵母高拷贝菌株的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.6 蛋白诱导表达 | 第26页 |
| 2.2.7 重组蛋白活性验证 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-32页 |
| 2.3.1 重组表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.3.2 真核表达载体双酶切及线性化鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.3 毕赤酵母工程菌的鉴定 | 第29页 |
| 2.3.4 重组蛋白的表达 | 第29-30页 |
| 2.3.5 细胞培养与活性验证 | 第30-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-33页 |
| 第三章 红鳍东方鲀IFN-γ 相关免疫基因的实时定量分析 | 第33-42页 |
| 3.1 材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第33页 |
| 3.1.2 试剂盒、菌株、工具酶 | 第33-34页 |
| 3.1.3 仪器与设备 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.2.1 原核重组红鳍东方鲀IFN-γ 蛋白的制备 | 第34页 |
| 3.2.2 体内免疫试验及组织取样 | 第34页 |
| 3.2.3 干扰素相关免疫基因引物设计 | 第34-35页 |
| 3.2.4 组织RNA提取 | 第35页 |
| 3.2.5 反转录 | 第35页 |
| 3.2.6 实时定量PCR | 第35-36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 3.3.1 重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第36页 |
| 3.3.2 原核重组蛋白活性鉴定 | 第36-37页 |
| 3.3.3 组织总RNA提取及反转录 | 第37页 |
| 3.3.4 实时定量PCR引物检验 | 第37-39页 |
| 3.3.5 免疫基因的组织表达 | 第39页 |
| 3.4 讨论 | 第39-42页 |
| 第四章 红鳍东方鲀肾组织RNA-seq分析 | 第42-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 4.2.1 组织RNA提取及检测 | 第42页 |
| 4.2.2 文库构建及上机测序 | 第42-43页 |
| 4.2.3 转录组生物信息学分析 | 第43-45页 |
| 4.3 结果及分析 | 第45-57页 |
| 4.3.1 转录组测序数据质量分析 | 第45-46页 |
| 4.3.2 测序数据比对到参考基因组(Mapping) | 第46-48页 |
| 4.3.3 基因表达量分析 | 第48-49页 |
| 4.3.4 差异基因的表达分析 | 第49-55页 |
| 4.3.5 SNP及可变剪接分析 | 第55-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-60页 |
| 4.4.1 RNA-Seq数据分析 | 第57-58页 |
| 4.4.2 鱼类对重组IFN蛋白的免疫应答 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
