中文摘要 | 第5-7页 |
abstract | 第7-8页 |
第一章 文献综述 | 第11-18页 |
1.1 植物和微生物之间的共生 | 第11页 |
1.2 豆科植物与根瘤菌的共生 | 第11-15页 |
1.2.1 豆科植物根瘤形成的过程 | 第11-12页 |
1.2.2 定型根瘤和不定型根瘤 | 第12-14页 |
1.2.3 豆科植物结瘤分子机制 | 第14-15页 |
1.3 翻译控制肿瘤蛋白 | 第15-16页 |
1.4 植物基因功能研究技术 | 第16页 |
1.5 刺槐与根瘤菌共生固氮的研究现状 | 第16-17页 |
1.6 技术路线 | 第17-18页 |
第二章 Rpf41基因CDNA末端的快速扩增(RACE) | 第18-29页 |
2.1 引言 | 第18页 |
2.2 材料、试剂和仪器 | 第18页 |
2.2.1 实验材料及载体 | 第18页 |
2.2.2 实验试剂 | 第18页 |
2.2.3 实验仪器 | 第18页 |
2.3 实验方法 | 第18-23页 |
2.3.1 刺槐根总RNA的提取及基因组DNA的去除 | 第18-20页 |
2.3.2 候选基因的cDNA末端快速扩增(RACE) | 第20-21页 |
2.3.3 目的片段胶回收 | 第21-22页 |
2.3.4 目的片段连接T载体及转化大肠杆菌 | 第22页 |
2.3.5 菌落PCR检测目的片段的连接情况 | 第22页 |
2.3.6 质粒的提取 | 第22-23页 |
2.3.7 全长的获得及序列分析 | 第23页 |
2.3.8 TCTP蛋白序列的一致性和相似性分析 | 第23页 |
2.4 结果与分析 | 第23-26页 |
2.4.1 总RNA提取及基因组DNA的去除结果 | 第23-24页 |
2.4.2 RACE反应结果 | 第24-26页 |
2.5 Rpf41序列分析 | 第26-28页 |
2.6 讨论 | 第28-29页 |
第三章 Rpf41基因亚细胞定位 | 第29-35页 |
3.1 引言 | 第29页 |
3.2 实验材料、仪器 | 第29页 |
3.2.1 实验材料 | 第29页 |
3.2.2 实验仪器 | 第29页 |
3.3 实验方法 | 第29-32页 |
3.3.1 亚细胞定位载体的构建 | 第29-31页 |
3.3.2 基因枪转化洋葱表皮细胞 | 第31-32页 |
3.4 结果与分析 | 第32-34页 |
3.4.1Rpf41亚细胞定位载体的构建 | 第32-33页 |
3.4.2 Rpf41亚细胞定位结果与分析 | 第33-34页 |
3.5 讨论 | 第34-35页 |
第四章 Rpf41基因的RNA沉默与过表达 | 第35-60页 |
4.1 引言 | 第35页 |
4.2 实验材料、试剂和仪器 | 第35页 |
4.2.1 实验材料 | 第35页 |
4.2.2 试剂与配方 | 第35页 |
4.2.3 实验仪器 | 第35页 |
4.3 实验方法 | 第35-42页 |
4.3.1RNAi载体的构建 | 第35-37页 |
4.3.2 过量表达载体的构建 | 第37-38页 |
4.3.3 重组质粒电转化发根农杆菌K599 | 第38页 |
4.3.4 刺槐的转化体系 | 第38-39页 |
4.3.5 实验结果鉴定 | 第39-42页 |
4.4 结果与分析 | 第42-58页 |
4.4.1 目的基因的扩增结果 | 第42-43页 |
4.4.2 RNA沉默载体的构建 | 第43页 |
4.4.3 过量表达载体的构建 | 第43页 |
4.4.4 转化苗植株表型检测 | 第43-47页 |
4.4.5 刺槐根部提取的总RNA质量检测 | 第47-48页 |
4.4.6 干扰及过表达效率检测 | 第48-51页 |
4.4.7 转化苗植株表型及根瘤的形态 | 第51-55页 |
4.4.8 根瘤显微形态观测 | 第55-58页 |
4.5 讨论 | 第58-60页 |
第五章 结论 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-68页 |
附录 | 第68-72页 |
致谢 | 第72-73页 |
作者简介 | 第73页 |