| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 中英文对照和缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-38页 |
| 1.1 引言 | 第14页 |
| 1.2 艰难梭菌的流行现状 | 第14-15页 |
| 1.3 艰难梭菌感染的风险因子 | 第15-16页 |
| 1.4 艰难梭菌感染的致病因子 | 第16-19页 |
| 1.5 艰难梭菌毒素的结构与功能 | 第19-22页 |
| 1.5.1 细胞受体结构域 | 第19-20页 |
| 1.5.2 转位结构域 | 第20-21页 |
| 1.5.3 自我剪切结构域 | 第21页 |
| 1.5.4 葡萄糖基转移酶活性结构域 | 第21-22页 |
| 1.6 艰难梭菌毒素的毒理作用 | 第22-25页 |
| 1.6.1 艰难梭菌毒素与Rho GTP酶的相互作用 | 第22-23页 |
| 1.6.2 艰难梭菌毒素的毒理作用 | 第23-25页 |
| 1.7 艰难梭菌感染的诊断、治疗与预防 | 第25-34页 |
| 1.7.1 艰难梭菌感染的诊断 | 第25-31页 |
| 1.7.2 艰难梭菌感染的治疗 | 第31-34页 |
| 1.7.3 艰难梭菌感染的预防 | 第34页 |
| 1.8 本课题的目的意义和主要研究内容 | 第34-38页 |
| 1.8.1 目的意义 | 第34-35页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第35-37页 |
| 1.8.3 技术路线 | 第37-38页 |
| 第二章 艰难梭菌毒素B突变体的设计、构建及毒性检测 | 第38-59页 |
| 2.1 引言 | 第38-39页 |
| 2.2 材料与方法 | 第39-50页 |
| 2.2.1 材料 | 第39页 |
| 2.2.2 仪器 | 第39-40页 |
| 2.2.3 试剂 | 第40-42页 |
| 2.2.4 细胞的培养 | 第42页 |
| 2.2.5 D97的二级结构分析 | 第42-43页 |
| 2.2.6 艰难梭菌毒素B突变体TcdB_(Δ1756-1780)及TcdBΔ1827-1851的构建 | 第43-48页 |
| 2.2.7 TcdB_(Δ1756-1780)及TcdB_(Δ1827-1851)的表达与纯化 | 第48-49页 |
| 2.2.8 TcdB_(Δ1756-1780)及TcdB_(Δ1827-1851)的体外及体内毒性的检测 | 第49-50页 |
| 2.2.9 TcdB_(Δ1756-1780)及TcdB_(Δ1827-1851)二级结构的圆二色谱分析 | 第50页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第50-57页 |
| 2.3.1 D97的二级结构预测 | 第50-51页 |
| 2.3.2 重组质粒pHis1525-TcdB_(Δ1756-1780)/TcdB_(Δ1827-1851)的构建 | 第51-53页 |
| 2.3.3 TcdB_(Δ1756-1780)及TcdB_(Δ1827-1851)在B.megaterium中的表达与纯化 | 第53-55页 |
| 2.3.4 TcdB_(Δ1756-1780)及TcdB_(Δ1827-1851)体内外毒性的测定 | 第55-56页 |
| 2.3.5 圆二色谱分析 | 第56-57页 |
| 2.4 本章小结 | 第57-59页 |
| 第三章 艰难梭菌毒素B突变体的功能研究 | 第59-76页 |
| 3.1 引言 | 第59页 |
| 3.2 材料与方法 | 第59-65页 |
| 3.2.1 材料 | 第59-60页 |
| 3.2.2 试剂 | 第60-61页 |
| 3.2.3 细胞的培养 | 第61页 |
| 3.2.4 突变毒素与细胞表面受体结合 | 第61-62页 |
| 3.2.5 突变毒素的葡萄糖基转移酶活性检测 | 第62-63页 |
| 3.2.6 突变毒素的自我剪切检测 | 第63页 |
| 3.2.7 TNS荧光探针分析毒素蛋白在酸性条件下的构象改变 | 第63-64页 |
| 3.2.8 突变毒素的穿孔功能检测 | 第64页 |
| 3.2.9 内涵体中毒素蛋白的检测 | 第64-65页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第65-74页 |
| 3.3.1 TcdB_(Δ1756-1780)葡萄糖基转移酶活性的测定 | 第65-67页 |
| 3.3.2 TcdB_(Δ1756-1780)与细胞表面受体结合的测定 | 第67-68页 |
| 3.3.3 TcdB_(Δ1756-1780)自我剪切作用的测定 | 第68-69页 |
| 3.3.4 TcdB_(Δ1756-1780)在酸性条件下构象改变及穿孔作用的测定 | 第69-71页 |
| 3.3.5 毒素在内涵体中的检测 | 第71-74页 |
| 3.4 本章小结 | 第74-76页 |
| 第四章 艰难梭菌TcdB单克隆抗体的制备 | 第76-88页 |
| 4.1 引言 | 第76-77页 |
| 4.2 材料与方法 | 第77-82页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第77页 |
| 4.2.2 试剂 | 第77-78页 |
| 4.2.3 B.megaterium原生质体的制备与转化 | 第78页 |
| 4.2.4 aTcdB的表达与纯化 | 第78-79页 |
| 4.2.5 抗原的准备 | 第79页 |
| 4.2.6 实验动物免疫 | 第79页 |
| 4.2.7 杂交瘤的制备与筛选 | 第79-81页 |
| 4.2.8 单克隆抗体的大量生产与纯化 | 第81-82页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第82-86页 |
| 4.3.1 aTcdB的表达与纯化 | 第82-83页 |
| 4.3.2 小鼠血清效价测定 | 第83-84页 |
| 4.3.3 杂交瘤的筛选 | 第84-85页 |
| 4.3.4 抗体的大量生产及纯化 | 第85-86页 |
| 4.4 本章小结 | 第86-88页 |
| 第五章 艰难梭菌TcdB单克隆抗体的评价与应用 | 第88-101页 |
| 5.1 引言 | 第88页 |
| 5.2 材料与方法 | 第88-93页 |
| 5.2.1 试剂 | 第88-89页 |
| 5.2.2 仪器 | 第89页 |
| 5.2.3 抗体的浓度测定及分型 | 第89页 |
| 5.2.4 抗体效价的测定 | 第89-90页 |
| 5.2.5 SPR测定抗体亲和力 | 第90页 |
| 5.2.6 HRP标记抗体 | 第90页 |
| 5.2.7 HRP标记抗体效价的测定 | 第90-91页 |
| 5.2.8 抗体在ELISA平台上的配对 | 第91页 |
| 5.2.9 胶体金免疫层析 | 第91-92页 |
| 5.2.10 抗体在胶体金免疫层析平台上的配对 | 第92页 |
| 5.2.11 胶体金免疫层析检测临床粪便样品 | 第92-93页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第93-99页 |
| 5.3.1 抗体的分型及浓度测定 | 第93页 |
| 5.3.2 抗体效价的测定 | 第93-94页 |
| 5.3.3 抗体亲和力的测定 | 第94-96页 |
| 5.3.4 HRP标记抗体的效价测定 | 第96-97页 |
| 5.3.5 抗体在ELISA平台上的配对 | 第97-98页 |
| 5.3.6 抗体在胶体金免疫检测平台上的应用 | 第98-99页 |
| 5.4 本章小结 | 第99-101页 |
| 结论与展望 | 第101-105页 |
| 结论 | 第101-103页 |
| 展望 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-120页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 附表 | 第123页 |
