| 致谢 | 第7-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| 1 生防真菌致病抗逆及胞内pH稳态调控机理的研究现状 | 第13-25页 |
| 1.1 昆虫病原真菌生物防治潜能的遗传基础 | 第13-15页 |
| 1.1.1 侵染循环与生防潜能 | 第13-14页 |
| 1.1.2 抗逆机制与生防潜能 | 第14-15页 |
| 1.2 真菌适应环境pH的机制 | 第15-19页 |
| 1.2.1 构巢曲霉Pal信号通路的激活与信号转导及调控 | 第15-18页 |
| 1.2.2 酵母Pal信号通路的激活与信号转导及调控 | 第18页 |
| 1.2.3 Pal信号通路与真菌致病性 | 第18-19页 |
| 1.3 Na~+/H~+反向转运蛋白Nhx1的研究现状 | 第19-21页 |
| 1.3.1 Nhx1蛋白的结构特征及亚细胞定位 | 第20页 |
| 1.3.2 Nhx1蛋白的生物学功能 | 第20-21页 |
| 1.4 液泡ATP激酶(V-ATPase)的结构及生物学功能 | 第21-23页 |
| 1.4.1 V-ATPase的结构 | 第21-22页 |
| 1.4.2 V-ATPase的生理功能 | 第22-23页 |
| 1.4.3 V-ATPase亚基H的结构与功能 | 第23页 |
| 1.5 展望 | 第23-25页 |
| 2 球孢白僵菌Pal通路依赖pH调控生长发育及高渗应答 | 第25-42页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌株和培养基 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂及试剂盒 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-31页 |
| 2.2.0 真菌DNA提取 | 第27页 |
| 2.2.1 真菌RNA提取及反转录 | 第27-28页 |
| 2.2.2 pacC及pal基因的克隆及分析 | 第28页 |
| 2.2.3 单基因敲除菌株及回补菌株的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.4 培养液酸化及有机酸含量的测定 | 第30页 |
| 2.2.5 表型实验 | 第30-31页 |
| 2.2.6 胞内液泡形态观察 | 第31页 |
| 2.2.7 数据分析 | 第31页 |
| 2.3 结果 | 第31-40页 |
| 2.3.1 球孢白僵菌PacC及Pal蛋白的特征 | 第31-33页 |
| 2.3.2 pacC或pal缺失导致培养液酸化延迟和胞内外有机酸含量变化 | 第33-35页 |
| 2.3.3 pacC及pal缺失改变不同pH环境中的高渗应答及胞内液泡形态 | 第35-37页 |
| 2.3.4 pacC及pal的缺失对生防潜能的影响 | 第37-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 3 球孢白僵菌Na~+/H~+逆向转运蛋白NM1的功能解析 | 第42-57页 |
| 3.1 材料 | 第43页 |
| 3.1.1 菌株和培养基 | 第43页 |
| 3.1.2 试剂及试剂盒 | 第43页 |
| 3.2 方法 | 第43-48页 |
| 3.2.1 球孢白僵菌Nhx1蛋白序列分析 | 第43页 |
| 3.2.2 nhx1转录动态分析 | 第43页 |
| 3.2.3 Nhx1的亚细胞定位 | 第43-44页 |
| 3.2.4 nhx1突变菌株的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.5 液泡pH的测定 | 第45-46页 |
| 3.2.6 液泡形态观察 | 第46页 |
| 3.2.7 表型实验 | 第46页 |
| 3.2.8 生物测定 | 第46页 |
| 3.2.9 酶活测定 | 第46-47页 |
| 3.2.10 胁迫敏感性及多元醇含量测定 | 第47页 |
| 3.2.11 数据统计分析 | 第47-48页 |
| 3.3 结果 | 第48-55页 |
| 3.3.1 球孢白僵菌Nhx1的基本特征 | 第48页 |
| 3.3.2 球孢白僵菌Nhx1的亚细胞定位 | 第48-50页 |
| 3.3.3 nhx1缺失导致液泡酸化并阻止液泡融合 | 第50-51页 |
| 3.3.4 nhx1缺失对生长及无性发育的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.5 nhx1缺失抑制侵染力和降低胞外酶的酶活 | 第52-54页 |
| 3.3.6 nhx1缺失影响细胞的胁迫敏感性和多元醇积累 | 第54-55页 |
| 3.4 讨论 | 第55-57页 |
| 4 球孢白僵菌液泡ATP激酶VmaH亚基的功能解析 | 第57-67页 |
| 4.1 材料 | 第58页 |
| 4.1.1 菌株和培养基 | 第58页 |
| 4.1.2 试剂及试剂盒 | 第58页 |
| 4.2 方法 | 第58-60页 |
| 4.2.1 球孢白僵菌中VmaH蛋白分析 | 第58页 |
| 4.2.2 vmaH突变菌株的构建 | 第58-59页 |
| 4.2.3 vmaH及相关基因的转录分析 | 第59页 |
| 4.2.4 VmaH的亚细胞定位 | 第59页 |
| 4.2.5 表型分析 | 第59-60页 |
| 4.2.6 真菌毒力的生物测定 | 第60页 |
| 4.2.7 细胞内外pH及胞外氨含量检测 | 第60页 |
| 4.2.8 数据统计与分析 | 第60页 |
| 4.3 结果 | 第60-65页 |
| 4.3.1 VmaH的特征、亚细胞定位及转录表达 | 第60-62页 |
| 4.3.2 vmaH缺失对胞内H~+平衡相关基因转录表达的影响 | 第62页 |
| 4.3.3 vmaH缺失影响液泡pH及胞外酸化 | 第62页 |
| 4.3.4 vmaH缺失对无性发育的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.5 vmaH缺失对菌落生长、胁迫敏感性及胞内多元醇积累的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.6 vmaH缺失对球孢白僵菌生防潜能的影响 | 第64-65页 |
| 4.4 讨论 | 第65-67页 |
| 5 结语 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-80页 |
| Summary | 第80-81页 |
| 附录：攻读博士学位期间的主要成果 | 第83页 |
