| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-20页 |
| 1.1 热休克蛋白（HSPs）与Dnajc5b | 第12-13页 |
| 1.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂与Rcet1 | 第13-14页 |
| 1.2.1 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 | 第13-14页 |
| 1.2.2 基因敲除Rcet1 | 第14页 |
| 1.3 蛋白质的分离纯化 | 第14-18页 |
| 1.3.1 根据蛋白质大小分离纯化蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3.2 根据溶解度不同分离纯化 | 第15-16页 |
| 1.3.3 根据电荷不同进行分离纯化 | 第16-17页 |
| 1.3.4 利用对配体的特异亲和力进行分离纯化 | 第17-18页 |
| 1.4 研究背景及意义 | 第18-20页 |
| 第2章 材料与方法 | 第20-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-26页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 质粒载体 | 第20-23页 |
| 2.1.4 引物 | 第23页 |
| 2.1.5.主要试剂和试剂盒 | 第23-24页 |
| 2.1.6 实验试剂配置 | 第24-25页 |
| 2.1.7 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 生物信息分析及实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第27-28页 |
| 2.2.1.1 生物信息学分析的主要数据库与分软件析 | 第27-28页 |
| 2.2.2 基因的克隆 | 第28-33页 |
| 2.2.2.1 小鼠睾丸组织RNA抽提 | 第28页 |
| 2.2.2.2 RT-PCR 扩增（Reverse ranscription-polymerase chain reaction） | 第28-29页 |
| 2.2.2.3 以cDNA第一链为模板扩增目的基因 | 第29-30页 |
| 2.2.2.4 高保真PCR克隆目的基因 | 第30页 |
| 2.2.2.5 T-A克隆 | 第30-31页 |
| 2.2.2.6 感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.2.2.7 转化 | 第31页 |
| 2.2.2.8 阳性单克隆菌的筛选及鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.2.9 质粒抽提（以质粒抽提试剂盒操作说明书为准） | 第32-33页 |
| 2.2.2.10 胶回收操作（以胶回收试剂盒说明为准）及分析 | 第33页 |
| 2.3 Dnajc5b差异表达检测 | 第33-39页 |
| 2.3.1 小鼠不同组织的差异表达检测 | 第33-34页 |
| 2.3.2 不同发育时期的差异表达检测 | 第34-35页 |
| 2.3.3 检测小鼠睾丸组织中Dnajc5b的差异表达 | 第35-36页 |
| 2.3.3.1 设置Dnajc5b靶基因的mRNA序列 | 第35页 |
| 2.3.3.2 操作程序 | 第35-36页 |
| 2.3.4 亚细胞定位技术检测Dnajc5b的差异表达 | 第36-39页 |
| 2.3.4.1 构建pEGFP-C3/Dnajc5b真核表达载体 | 第36-38页 |
| 2.3.4.2 Lipofectamine2000介导的基因转染 | 第38-39页 |
| 2.3.4.3 pEGFP-C3/Dnajc5b 质粒瞬时转染卵巢癌细胞（SKOV3） | 第39页 |
| 2.4 Dnajc5b 蛋白诱导表达和分离纯化检测 | 第39-47页 |
| 2.4.1 Dnajc5b蛋白诱导表达及检测 | 第39-46页 |
| 2.4.1.1 Dnajc5b蛋白分析和基因合成改造 | 第39-41页 |
| 2.4.1.2 构建pET-28a/Dnajc5b原核表达载体 | 第41-43页 |
| 2.4.1.3 Dnajc5b蛋白的诱导表达 | 第43-44页 |
| 2.4.1.4 SDS-PAGE电泳检测Dnajc5b蛋白 | 第44-45页 |
| 2.4.1.5 Western Blot检测Dnajc5b蛋白 | 第45-46页 |
| 2.4.2 Dnajc5b目的蛋白的分离纯化及检测 | 第46-47页 |
| 2.4.2.1 可溶性Dnajc5b蛋白样品准备 | 第46页 |
| 2.4.2.2 可溶性Dnajc5b蛋白亲和层析纯化 | 第46-47页 |
| 2.5 基因敲除小鼠Rcet1检测 | 第47-50页 |
| 2.5.1 睾丸及附睾表型分析 | 第48页 |
| 2.5.2 睾丸及附睾组织切片的检测 | 第48-50页 |
| 第3章 结果与分析 | 第50-84页 |
| 3.1 小鼠Dnajc5b基因的生物信息学分析结果 | 第50-67页 |
| 3.1.1 EST | 第50-51页 |
| 3.1.2 基因序列的 | 第51-52页 |
| 3.1.3 同源性的比较 | 第52-54页 |
| 3.1.4 小鼠的Dnajc5b基因的外显子 | 第54-57页 |
| 3.1.5 小鼠Dnajc5b基因的染色体定位 | 第57页 |
| 3.1.6 小鼠Dnajc5b基因翻译氨基酸 | 第57-58页 |
| 3.1.7 Dnajc5b基因的剪切本的阅读框 | 第58-59页 |
| 3.1.8 小鼠Dnajc5b蛋白结构域 | 第59-60页 |
| 3.1.9 蛋白质二级结构 | 第60-61页 |
| 3.1.10 Dnajc5b蛋白质的亚细胞定位 | 第61-62页 |
| 3.1.11 小鼠Dnajc5b基因蛋白质的理化性质 | 第62-63页 |
| 3.1.12 小鼠Dnajc5b蛋白质疏水性 | 第63-64页 |
| 3.1.13 蛋白质的跨膜区 | 第64-66页 |
| 3.1.14 Dnajc5b基因的酶切位点 | 第66-67页 |
| 3.2 Rcet1生物信息学分析结果 | 第67-69页 |
| 3.2.1 小鼠Rcet1的基因序列 | 第67-68页 |
| 3.2.2 EST | 第68-69页 |
| 3.3 小鼠Dnajc5b基因的克隆 | 第69-72页 |
| 3.3.1 睾丸的RNA提取 | 第69页 |
| 3.3.2 RT-PCR扩增 | 第69-70页 |
| 3.3.3 Dnajc5b基因的扩增 | 第70页 |
| 3.3.4 以小鼠睾丸cDNA为模板高保真PCR克隆目的基因 | 第70-71页 |
| 3.3.5 阳性克隆的筛选及鉴定 | 第71页 |
| 3.3.6 阳性克隆的检测 | 第71-72页 |
| 3.4 Dnajc5b差异表达检测分析 | 第72-77页 |
| 3.4.1 Dnajc5b在小鼠不同组织中差异表达检测分析 | 第72-73页 |
| 3.4.2 Dnajc5b在小鼠睾丸不同发育时期的差异表达检测分析 | 第73页 |
| 3.4.3 检测睾丸中Dnajc5b差异表达分析 | 第73-74页 |
| 3.4.4 检测Dnajc5b蛋白的差异表达分析 | 第74-77页 |
| 3.4.4.1 pEGFP-C3/Dnajc5b融合载体的构建与检测 | 第74-75页 |
| 3.4.4.2 pEGFP-C3/Dnajc5b融合基因亚细胞定位检测 | 第75-77页 |
| 3.5 Dnajc5b蛋白的诱导表达和分离纯化检测分析 | 第77-81页 |
| 3.5.1 Dnajc5b蛋白的诱导表达及检测分析 | 第77-79页 |
| 3.5.1.1 PET-28a/Dnajc5b融合表达质粒的构建与鉴定检测分析 | 第77-78页 |
| 3.5.1.2 Dnajc5b基因蛋白的表达及检测分析 | 第78-79页 |
| 3.5.2 分离纯化制备Dnajc5b蛋白及检测分析 | 第79-81页 |
| 3.5.2.1 分离纯化制备Dnajc5b蛋白 | 第79-80页 |
| 3.5.2.2 Dnajc5b蛋白分离纯化产物的检测分析 | 第80-81页 |
| 3.6 基因敲除小鼠Rcet1的检测 | 第81-84页 |
| 3.6.1 睾丸及附睾组织器官的检测 | 第81-82页 |
| 3.6.2 睾丸及附睾组织切片检测 | 第82-84页 |
| 第4章 结语 | 第84-85页 |
| 4.1 结论 | 第84页 |
| 4.2 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 附录 | 第90-91页 |
| 攻读硕士学位期间主要研究成果 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
