| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 1 引言 | 第9-18页 |
| 1.1 黄酮类化合物的基本概况 | 第9-10页 |
| 1.1.1 黄酮类化合物的结构与分类 | 第9页 |
| 1.1.2 黄酮类化合物的功能 | 第9-10页 |
| 1.2 黄酮类化合物的合成路径 | 第10-11页 |
| 1.3 查尔酮异构酶 | 第11-15页 |
| 1.3.1 查尔酮异构酶的分离与分类 | 第11-12页 |
| 1.3.2 CHI蛋白的结构与作用机制 | 第12-13页 |
| 1.3.3 CHI基因的表达特性 | 第13-14页 |
| 1.3.4 CHI的系统进化 | 第14页 |
| 1.3.5 CHI转基因的应用 | 第14-15页 |
| 1.4 黄酮醇合成酶 | 第15-17页 |
| 1.4.1 黄酮醇合成酶的功能与分离 | 第15-16页 |
| 1.4.2 FLS在植物中的表达及调控 | 第16页 |
| 1.4.3 FLS转基因的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 中间锦鸡儿的概况 | 第17页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-27页 |
| 2.1 试验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第18页 |
| 2.1.2 菌株与质粒载体 | 第18页 |
| 2.1.3 仪器与试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.4 引物合成与测序 | 第19-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 植物材料的培养 | 第20页 |
| 2.2.2 培养基的配制 | 第20页 |
| 2.2.3 中间锦鸡儿和拟南芥RNA提取及cDNA的获得 | 第20-21页 |
| 2.2.4 感受态的制备和目的片段的转化 | 第21页 |
| 2.2.5 质粒的提取及纯化 | 第21页 |
| 2.2.6 目的片段的克隆 | 第21-23页 |
| 2.2.7 目的片段的生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.2.8 不同胁迫处理下以及不同部位基因表达量的分析 | 第23页 |
| 2.2.9 植物表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 2.2.10 拟南芥的遗传转化 | 第24页 |
| 2.2.11 转基因植株的筛选 | 第24页 |
| 2.2.12 纯合体植株CiCHI与CiFLS基因转录水平的检测 | 第24-25页 |
| 2.2.13 纯合体植株CiCHI与CiFLS蛋白的检测(Western Blot) | 第25页 |
| 2.2.14 纯合体植株体内黄酮类化合物及花青素含量的检测 | 第25-27页 |
| 3 结果与分析 | 第27-40页 |
| 3.1 中间锦鸡儿总RNA的提取 | 第27页 |
| 3.2 中间锦鸡儿CiCHI和CiFLS基因全长序列的获得 | 第27-29页 |
| 3.2.1 CiCHI基因的保守片段克隆以及3’RACE和5’RACE | 第27-28页 |
| 3.2.2 CiFLS基因的3’RACE和5’RACE | 第28页 |
| 3.2.3 CiCHI和CiFLS基因cDNA的克隆结果及序列分析 | 第28-29页 |
| 3.3 中间锦鸡儿CiCHI和CiFLS基因的生物信息学分析 | 第29-32页 |
| 3.3.1 氨基酸序列分析及蛋白理化性质 | 第29-30页 |
| 3.3.2 系统进化分析 | 第30-32页 |
| 3.4 CiCHI与CiFLS基因对不同处理的响应及在不同部位的表达 | 第32-34页 |
| 3.4.1 CiCHI与CiFLS基因对UV-C处理的响应 | 第32页 |
| 3.4.2 CiCHI与CiFLS基因对NaCl处理的响应 | 第32-33页 |
| 3.4.3 CiCHI与CiFLS基因对ABA处理的响应 | 第33-34页 |
| 3.4.4 CiCHI与CiFLS基因在不同部位的表达 | 第34页 |
| 3.5 筛选CiCHI和CiFLS转基因纯合体植株 | 第34-37页 |
| 3.5.1 CiCHI和CiFLS基因的过表达载体构建 | 第34-35页 |
| 3.5.2 转基因植株的筛选 | 第35-36页 |
| 3.5.3 转基因纯合体植株转录水平的qRT-PCR检测结果 | 第36-37页 |
| 3.5.4 转基因纯合体植株蛋白的检测 | 第37页 |
| 3.6 转基因纯合体植株总黄酮及花青素含量的检测 | 第37-40页 |
| 3.6.1 过表达CiCHI基因的转基因植株体内总黄酮及花青素的含量 | 第37-39页 |
| 3.6.2 过表达CiFLS基因的转基因植株体内总黄酮及花青素的含量 | 第39-40页 |
| 4 讨论与结论 | 第40-42页 |
| 4.1 讨论 | 第40-41页 |
| 4.1.1 过表达CiCHI基因提高植株体内总黄酮的含量 | 第40页 |
| 4.1.2 过表达CiFLS基因未能改变植株体内总黄酮及花青素的含量 | 第40-41页 |
| 4.2 结论 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-50页 |
| 作者简介 | 第50页 |
