| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第17-32页 |
| 1.1 引言 | 第17-19页 |
| 1.1.1 研究背景 | 第17-19页 |
| 1.1.2 研究目的和意义 | 第19页 |
| 1.2 国内外研究现状及评述 | 第19-29页 |
| 1.2.1 松材线虫致病假说 | 第19-21页 |
| 1.2.2 松材线虫空洞化理论 | 第21-23页 |
| 1.2.3 松材线虫激发基因 | 第23-25页 |
| 1.2.4 松材线虫解毒基因 | 第25-27页 |
| 1.2.5 松材线虫模拟基因 | 第27-28页 |
| 1.2.6 研究评述 | 第28-29页 |
| 1.3 研究目标和主要研究内容 | 第29-31页 |
| 1.3.1 主要研究目标 | 第29页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第29-31页 |
| 1.4 研究技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 松材线虫CYP450基因与松树蒎烯类物质代谢的相关性研究 | 第32-40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第33-35页 |
| 2.1.1 松材线虫接种 | 第33页 |
| 2.1.2 松树蒎烯合成酶apin基因表达模式研究 | 第33-34页 |
| 2.1.3 松树蒎烯类物质含量检测 | 第34-35页 |
| 2.1.4 松材线虫CYP450基因表达模式检测 | 第35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-39页 |
| 2.2.1 松树蒎烯合成酶apin基因表达模式 | 第35-36页 |
| 2.2.2 松材线虫接种马尾松后主要蒎烯类含量检测 | 第36-37页 |
| 2.2.3 松材线虫细胞色素P450基因表达模式 | 第37-39页 |
| 2.3 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 松材线虫CYP450基因克隆和生物信息学分析 | 第40-55页 |
| 3.1 材料与方法 | 第40-43页 |
| 3.1.1 松材线虫处理 | 第40页 |
| 3.1.2 松材线虫总RNA提取 | 第40页 |
| 3.1.3 反转录合成c DNA | 第40-41页 |
| 3.1.4 CYP450基因PCR扩增 | 第41页 |
| 3.1.5 电泳检测与胶回收 | 第41-42页 |
| 3.1.6 DNA产物连接 | 第42页 |
| 3.1.7 连接产物转化感受态细胞 | 第42页 |
| 3.1.8 重组克隆子的筛选与鉴定 | 第42-43页 |
| 3.1.9 质粒提取及测序 | 第43页 |
| 3.1.10 生物信息学分析 | 第43页 |
| 3.2 结果与分析 | 第43-54页 |
| 3.2.1 松材线虫CYP450基因RT-PCR | 第43-44页 |
| 3.2.2 松材线虫CYP450基因序列分析 | 第44-47页 |
| 3.2.3 松材线虫CYP450基因氨基酸序列理化性质 | 第47-50页 |
| 3.2.4 松材线虫CYP450基因编码蛋白结构域分析及功能预测 | 第50-52页 |
| 3.2.5 松材线虫CYP450基因编码蛋白亚细胞定位分析 | 第52页 |
| 3.2.6 松材线虫CYP450基因编码蛋白二级结构预测 | 第52-54页 |
| 3.3 小结 | 第54-55页 |
| 第四章 松材线虫CYP450基因RNA干扰载体构建 | 第55-63页 |
| 4.1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 4.1.1 CYP450基因ds RNA模板引物设计 | 第55-56页 |
| 4.1.2 CYP450基因ds RNA模板合成 | 第56页 |
| 4.1.3 CYP450基因ds RNA模板胶回收 | 第56页 |
| 4.1.4 CYP450基因ds RNA模板与质粒载体连接 | 第56-57页 |
| 4.1.5 CYP450基因ds RNA合成 | 第57页 |
| 4.1.6 CYP450基因ds RNA产物纯化 | 第57-58页 |
| 4.2 结果与分析 | 第58-62页 |
| 4.2.1 松材线虫ds RNA模板合成 | 第58页 |
| 4.2.2 CYP450基因ds RNA模板胶回收 | 第58-59页 |
| 4.2.3 CYP450基因ds RNA模板重组质粒测序鉴定 | 第59-61页 |
| 4.2.4 CYP450基因ds RNA合成 | 第61-62页 |
| 4.3 小结 | 第62-63页 |
| 第五章 松材线虫CYP450基因RNAi后致病性研究 | 第63-73页 |
| 5.1 材料与方法 | 第64-66页 |
| 5.1.1 松材线虫RNAi | 第64页 |
| 5.1.2 RNAi松材线虫接种5年生马尾松 | 第64页 |
| 5.1.3 RT-PCR检测松材线虫RNAi干扰效果 | 第64-65页 |
| 5.1.4 RNAi松材线虫接种后松树蒎烯合成酶基因表达模式检测 | 第65页 |
| 5.1.5 RNAi松材线虫接种后松树蒎烯类物质含量测定 | 第65页 |
| 5.1.6 RNAi松材线虫接种马尾松后在寄主体内繁殖率测定 | 第65页 |
| 5.1.7 RNAi松材线虫接种马尾松后CYP450基因表达模式测定 | 第65-66页 |
| 5.2 结果与分析 | 第66-71页 |
| 5.2.1 松材线虫RNA干扰效果检测 | 第66页 |
| 5.2.2 接种RNAi松材线虫后松树蒎烯合成酶apin基因表达模式 | 第66-67页 |
| 5.2.3 接种RNAi松材线虫后松树蒎烯含量测定 | 第67-68页 |
| 5.2.4 RNAi松材线虫接种马尾松后在寄主体内繁殖率测定 | 第68-69页 |
| 5.2.5 RNAi松材线虫接种马尾松后CYP450基因表达模式 | 第69-71页 |
| 5.2.6 RNAi松材线虫接种马尾松后寄主松树症状 | 第71页 |
| 5.3 小结 | 第71-73页 |
| 第六章 蒎烯胁迫下松材线虫CYP450基因RNAi后的繁殖率与雌雄比变化 | 第73-85页 |
| 6.1 材料与方法 | 第74-75页 |
| 6.1.1 实验菌株和培养条件 | 第74页 |
| 6.1.2 松材线虫培养和收集 | 第74页 |
| 6.1.3 松材线虫接种和计数 | 第74页 |
| 6.1.4 PDA灰葡萄培养基上雌雄比变化 | 第74页 |
| 6.1.5 松材线虫CYP450基因RNAi | 第74-75页 |
| 6.1.6 不同蒎烯类物质对RNAi前后松材线虫雌雄比变化的影响 | 第75页 |
| 6.1.7 数据分析 | 第75页 |
| 6.2 结果分析 | 第75-84页 |
| 6.2.1 松材线虫形态学特征 | 第75-76页 |
| 6.2.2 PDA真菌培养基上松材线虫雌雄比 | 第76-77页 |
| 6.2.3 蒎烯物质对未RNAi松材线虫繁殖率影响 | 第77-78页 |
| 6.2.4 CYP450基因RNAi后松材线虫繁殖率变化 | 第78页 |
| 6.2.5 α-蒎烯和β-蒎烯混合处理对RNAi松材线虫繁殖率的影响 | 第78-79页 |
| 6.2.6 α-蒎烯处理条件下CYP33C9基因RNAi松材线虫繁殖率 | 第79-80页 |
| 6.2.7 α-蒎烯处理条件下CYP33C4基因RNAi松材线虫繁殖率 | 第80页 |
| 6.2.8 蒎烯物质对未RNAi松材线虫雌雄比影响 | 第80-81页 |
| 6.2.9 CYP450基因RNAi后松材线虫雌雄比变化 | 第81页 |
| 6.2.10 α-蒎烯和β-蒎烯混合处理对RNAi松材线虫雌雄比的影响 | 第81-82页 |
| 6.2.11 α-蒎烯处理条件下CYP33C9基因RNAi松材线虫雌雄比 | 第82-83页 |
| 6.2.12 α-蒎烯处理条件下CYP33C4基因RNAi松材线虫雌雄比 | 第83-84页 |
| 6.3 小结 | 第84-85页 |
| 第七章 结论与讨论 | 第85-93页 |
| 7.1 结论 | 第85-86页 |
| 7.2 讨论 | 第86-91页 |
| 7.3 展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-103页 |
| 附录 A：论文中主要物种中文名称及拉丁文 | 第103-104页 |
| 附录 B：英文缩略词及中文对照表 | 第104-105页 |
| 在读期间的学术研究 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
