| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-28页 |
| 第一章 卵母细胞和胚胎的玻璃化冷冻 | 第13-20页 |
| 1.1 玻璃化冷冻的定义及历史 | 第13-14页 |
| 1.1.1 玻璃化冷冻的定义 | 第13页 |
| 1.1.2 玻璃化冷冻的步骤 | 第13页 |
| 1.1.3 玻璃化冷冻的历史 | 第13-14页 |
| 1.2 卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻的发展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 开放式拉长麦管法（Open pulled straw, OPS） | 第15页 |
| 1.2.2 封闭式拉长麦管法（Closed pulled straw, CPS） | 第15页 |
| 1.2.3 冷冻环玻璃化法(Cryoloop Vitrification) | 第15页 |
| 1.2.4 半麦管法（Hemi-straw） | 第15-16页 |
| 1.2.5 Cryotop法 | 第16页 |
| 1.2.6 CryoTip法 | 第16页 |
| 1.2.7 微滴法 | 第16页 |
| 1.2.8 固体表面冷冻法 | 第16页 |
| 1.2.9 Cryotech法 | 第16-17页 |
| 1.3 玻璃化冷冻保护剂 | 第17-18页 |
| 1.3.1 冷冻保护剂的发展 | 第17页 |
| 1.3.2 冷冻保护剂的分类 | 第17-18页 |
| 1.4 玻璃化冷冻安全性 | 第18-20页 |
| 第二章 DNA损伤 | 第20-28页 |
| 2.1 基因组完整性的重要性 | 第20页 |
| 2.2 不同性质的DNA损伤及其来源 | 第20-21页 |
| 2.2.1 内源性损伤来源 | 第20-21页 |
| 2.2.2 环境中的辐射 | 第21页 |
| 2.2.3 抗肿瘤药物 | 第21页 |
| 2.3 DNA损伤应答反应 | 第21-23页 |
| 2.3.1 DNA双链断裂的监督和信号传递 | 第22-23页 |
| 2.4 DNA损伤应答反应引起的细胞活动 | 第23-24页 |
| 2.4.1 细胞周期停滞和衰老 | 第23页 |
| 2.4.2 细胞凋亡 | 第23-24页 |
| 2.5 DNA损伤修复机制 | 第24-26页 |
| 2.5.1 直接修复 | 第24页 |
| 2.5.2 碱基切除修复(BER) | 第24页 |
| 2.5.3 核苷酸切除修复(NER) | 第24-25页 |
| 2.5.4 错配修复(MMR) | 第25页 |
| 2.5.5 链断裂修复 | 第25-26页 |
| 2.6 DNA损伤应答反应破坏和基因组完整性受损的后果 | 第26-28页 |
| 2.6.1 与DNA受损应答反应缺陷相关的疾病 | 第26页 |
| 2.6.2 DNA损伤修复缺陷和致瘤性转化 | 第26-27页 |
| 2.6.3 衰老 | 第27-28页 |
| 实验部分 | 第28-60页 |
| 第三章 卵母细胞玻璃化冷冻对DNA损伤的影响 | 第28-45页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-31页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第29页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第29页 |
| 3.1.3 主要试剂和药品 | 第29-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-36页 |
| 3.2.1 卵母细胞的采集 | 第31-32页 |
| 3.2.2 MⅡ期卵母细胞的冷冻和解冻 | 第32页 |
| 3.2.3 卵母细胞的孤雌激活和胚胎培养 | 第32页 |
| 3.2.4 彗星实验 | 第32-33页 |
| 3.2.5 卵母细胞和孤雌胚胎的免疫荧光染色 | 第33页 |
| 3.2.6 免疫荧光染色图片分析 | 第33-34页 |
| 3.2.7 孤雌囊胚凋亡染色 | 第34页 |
| 3.2.8 孤雌囊胚细胞计数 | 第34页 |
| 3.2.9 卵母细胞及孤雌胚胎的qRT-PCR检测 | 第34-35页 |
| 3.2.10 数据统计分析 | 第35-36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-41页 |
| 3.3.1 MⅡ期卵母细胞彗星实验结果 | 第36-37页 |
| 3.3.2 卵母细胞玻璃化冷冻对DNA损伤相关基因表达的影响 | 第37-38页 |
| 3.3.3 卵母细胞玻璃冷冻对 5hmC和 γH2AX的影响 | 第38-40页 |
| 3.3.4 卵母细胞玻璃化冷冻对孤雌囊胚凋亡的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.5 卵母细胞玻璃冷冻对孤雌胚胎发育的影响 | 第41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-45页 |
| 第四章 卵母细胞玻璃化冷冻对印记基因DNA甲基化的影响 | 第45-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第46页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第46页 |
| 4.1.3 主要试剂和药品 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-49页 |
| 4.2.1 卵母细胞的采集 | 第46页 |
| 4.2.2 MⅡ期卵母细胞的冷冻和解冻 | 第46页 |
| 4.2.3 体外受精（IVF）和胚胎培养 | 第46-47页 |
| 4.2.4 胚胎移植 | 第47页 |
| 4.2.5 出生后小鼠各器官采集、基因组DNA提取和RNA提取 | 第47-48页 |
| 4.2.6 定量引物设计 | 第48页 |
| 4.2.7 卵母细胞的qRT-PCR检测 | 第48页 |
| 4.2.8 亚硫酸氢盐测序法 | 第48-49页 |
| 4.2.9 数据统计分析 | 第49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-56页 |
| 4.3.1 卵母细胞玻璃化冷冻对MⅡ期卵母细胞印记基因表达的影响 | 第49-50页 |
| 4.3.2 玻璃化冷冻对MⅡ期卵母细胞印记基因DNA甲基化的影响 | 第50-52页 |
| 4.3.3 卵母细胞玻璃化冷冻对其后代器官中印记基因表达的影响 | 第52页 |
| 4.3.4 卵母细胞玻璃化冷冻对其后代器官中印记基因DNA甲基化的影响 | 第52-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-58页 |
| 4.5 小结 | 第58-59页 |
| 全文结论 | 第59-60页 |
| 创新点和后续研究工作 | 第60-61页 |
| 缩略词表 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
