| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-24页 |
| ·腈水解酶 | 第10-17页 |
| ·腈水解酶的简介 | 第10页 |
| ·腈水解酶的分类 | 第10-11页 |
| ·腈水解酶的来源 | 第11-13页 |
| ·腈水解酶的催化机制 | 第13-14页 |
| ·腈水解酶的应用 | 第14-17页 |
| ·腈水解酶在有机合成中的应用 | 第15-16页 |
| ·腈水解酶在工业和农业上的应用 | 第16-17页 |
| ·尼克酸概述 | 第17-20页 |
| ·尼克酸的性质和用途 | 第17-18页 |
| ·尼克酸的生产方法 | 第18-19页 |
| ·尼克酸的生产概况 | 第19-20页 |
| ·未知序列基因的克隆策略 | 第20-22页 |
| ·简并PCR | 第21页 |
| ·热不对称交错PCR(TAIL-PCR) | 第21-22页 |
| ·本课题的意义和主要研究内容 | 第22-24页 |
| 第2章 Rhodobacter sp.LHS-305腈水解酶基因的克隆和重组质粒的构建 | 第24-42页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·材料和方法 | 第24-34页 |
| ·菌种和质粒 | 第24页 |
| ·试剂盒和工具酶 | 第24页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第24-25页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第25-26页 |
| ·主要实验技术 | 第26-28页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| ·DNA电泳凝胶回收 | 第26-27页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·Rhodobacter sp.LHS-305腈水解酶基因的克隆和测序 | 第28-32页 |
| ·基因克隆的总体策略 | 第28-29页 |
| ·简并PCR扩增保守区序列 | 第29-30页 |
| ·PCR扩增侧翼序列 | 第30-31页 |
| ·TA克隆 | 第31页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第31-32页 |
| ·腈水解酶基因全长扩增 | 第32页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第32-34页 |
| ·克隆载体和PCR产物的连接 | 第32-33页 |
| ·表达载体和重组克隆载体的双酶切 | 第33页 |
| ·酶切产物的连接与转化 | 第33-34页 |
| ·结果和分析 | 第34-41页 |
| ·Rhodobacter sp.LHS-305腈水解酶基因部分片段的扩增 | 第34-36页 |
| ·TAIL-PCR扩增腈水解酶侧翼序列 | 第36-37页 |
| ·扩增腈水解酶基因全长 | 第37-40页 |
| ·重组质粒pET28a-NIT的构建 | 第40-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第3章 腈水解酶基因的表达、纯化和酶学性质研究 | 第42-56页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·材料和方法 | 第42-48页 |
| ·菌种和质粒 | 第42页 |
| ·培养基和缓冲液 | 第42-43页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第43页 |
| ·主要的实验方法与技术 | 第43-47页 |
| ·重组腈水解酶的诱导表达 | 第43-44页 |
| ·亲和层析纯化重组腈水解酶 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第44页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第44-45页 |
| ·酶活力的测定 | 第45-47页 |
| ·重组腈水解酶性质的研究 | 第47-48页 |
| ·酶分子量的测定 | 第47页 |
| ·温度和PH对酶活性的影响 | 第47-48页 |
| ·潜在抑制剂和助溶剂对酶活性的影响 | 第48页 |
| ·酶的底物特异性研究 | 第48页 |
| ·酶促反应动力学研究 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-55页 |
| ·腈水解酶的纯化结果 | 第48-50页 |
| ·酶的最适反应温度和最适反应PH | 第50-51页 |
| ·潜在抑制剂和助溶剂对酶活的影响 | 第51-52页 |
| ·腈水解酶的底物特异性 | 第52-53页 |
| ·酶促反应动力学研究 | 第53-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 第4章 结论和展望 | 第56-58页 |
| ·结论 | 第56页 |
| ·不足与展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 科研成果 | 第66页 |
