乌头GGPS基因克隆分析及双酯型生物碱生物合成途径分析
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第9-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-19页 |
| 1.1 附子及其生物活性研究 | 第13-14页 |
| 1.2 二萜生物碱研究 | 第14-16页 |
| 1.3 植物GGPS基因研究 | 第16-17页 |
| 1.4 植物基因克隆 | 第17页 |
| 1.5 实时荧光定量PCR | 第17-18页 |
| 1.6 乌头碱类生物碱检测 | 第18页 |
| 1.7 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19-20页 |
| 2.1.2 质粒、菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第21页 |
| 2.1.5 引物合成与序列测定 | 第21页 |
| 2.2 GGPS基因全长克隆 | 第21-29页 |
| 2.2.1 组织培养 | 第21-22页 |
| 2.2.2 合成cDNA第一链 | 第22-23页 |
| 2.2.3 简并引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.4 核心序列PCR扩增 | 第24-26页 |
| 2.2.5 3'RACE | 第26-28页 |
| 2.2.6 基因全长PCR扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.7 GGPS基因生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.3 基因组织表达分析 | 第29-34页 |
| 2.3.1 RNA提取及反转录 | 第29-31页 |
| 2.3.2 qPCR引物设计 | 第31-32页 |
| 2.3.3 半定量PCR | 第32-33页 |
| 2.3.4 qPCR | 第33-34页 |
| 2.4 双酯型生物碱含量分析 | 第34-37页 |
| 2.4.1 色谱条件 | 第34页 |
| 2.4.2 提取方法 | 第34页 |
| 2.4.3 方法学考察 | 第34-36页 |
| 2.4.4 含量测定 | 第36-37页 |
| 2.5 相关性分析 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-58页 |
| 3.1 RNA提取及反转录 | 第37-38页 |
| 3.2 GGPS基因克隆 | 第38-40页 |
| 3.2.1 组织培养 | 第38页 |
| 3.2.2 核心序列扩增 | 第38-39页 |
| 3.2.3 3'RACE | 第39-40页 |
| 3.2.4 基因全长扩增 | 第40页 |
| 3.3 GGPS生物信息学分析 | 第40-46页 |
| 3.3.1 序列比对 | 第40-41页 |
| 3.3.2 蛋白质翻译 | 第41-43页 |
| 3.3.3 多重序列比对 | 第43-44页 |
| 3.3.4 分子系统进化分析 | 第44-45页 |
| 3.3.5 蛋白质理化性质与3D结构预测 | 第45-46页 |
| 3.4 GGPS基因组织表达分析 | 第46-51页 |
| 3.4.1 内参基因核心片段的获得及引物设计 | 第46-47页 |
| 3.4.2 半定量PCR | 第47-48页 |
| 3.4.3 qPCR | 第48-51页 |
| 3.5 双酯型生物碱含量分析 | 第51-57页 |
| 3.5.1 方法学考察 | 第51-55页 |
| 3.5.2 含量测定分析 | 第55-57页 |
| 3.6 相关性分析 | 第57-58页 |
| 4 讨论及结论 | 第58-60页 |
| 4.1 乌头GGPS基因克隆 | 第58页 |
| 4.2 乌头GGPS基因的表达分析 | 第58-59页 |
| 4.3 乌头乌头碱含量分析 | 第59页 |
| 4.4 乌头GGPS基因与乌头碱生物合成 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
