| 摘要 | 第1-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略语(Abbreviation) | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-42页 |
| 1. 非生物胁迫 | 第18-25页 |
| ·植物应答非生物胁迫的基因 | 第19页 |
| ·植物应答非生物胁迫的信号网络 | 第19-22页 |
| ·植物对胁迫相关基因的调控 | 第22-23页 |
| ·参与非生物胁迫信号途径的激素 | 第23-25页 |
| 2. 植物中的微管和微管结合蛋白MAP65 | 第25-32页 |
| ·植物微管和微管结合蛋白MAP65 | 第25-28页 |
| ·MAPK与微管及微管结合蛋白MAP65的关系 | 第28-30页 |
| ·微管及微管结合蛋白MAP65参与非生物胁迫 | 第30-32页 |
| 3. 植物NAC转录因子 | 第32-39页 |
| ·NAC的结构特征及分类 | 第33-34页 |
| ·NAC转录因子的表达 | 第34-35页 |
| ·NAC转录因子的靶基因和结合的顺式作用元件 | 第35页 |
| ·NAC转录因子的调节 | 第35-36页 |
| ·植物NAC转录因子在非生物和生物胁迫中的作用 | 第36-39页 |
| 4. 本研究的目的和意义 | 第39-42页 |
| 第二章 玉米ZmMAP65-1a参与BR诱导的抗氧化防护 | 第42-74页 |
| 第一节 玉米ZmMAP65-1a基因克隆、序列分析及亚细胞定位 | 第42-53页 |
| 1. 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·供试材料 | 第43-44页 |
| ·目标基因的序列分析及克隆 | 第44-45页 |
| ·ZmMAP65-1a的亚细胞定位 | 第45-46页 |
| 2. 结果与分析 | 第46-52页 |
| ·目标基因的序列分析 | 第46页 |
| ·目标基因的克隆 | 第46-49页 |
| ·ZmMAP65-1a的亚细胞定位 | 第49-52页 |
| 3. 讨论 | 第52-53页 |
| 第二节 ZmMAP65-1a参与BR诱导的抗氧化防护 | 第53-62页 |
| 1. 材料与方法 | 第54-57页 |
| ·植物材料与处理 | 第54页 |
| ·RNA提取及cDNA合成 | 第54页 |
| ·dsRNA的引物设计 | 第54页 |
| ·dsRNA的体外转录合成 | 第54-55页 |
| ·玉米原生质体分离及转化 | 第55页 |
| ·抗氧化酶活性的测定 | 第55-56页 |
| ·荧光定量RT-PCR表达分析 | 第56-57页 |
| 2. 结果与分析 | 第57-61页 |
| ·BR诱导ZmMAP65-1a基因表达的时间进程分析 | 第57页 |
| ·ZmMAP65-1a基因瞬时表达和瞬时沉默对抗氧化防护酶基因表达的影响 | 第57-58页 |
| ·ZmMAP65-1a基因瞬时表达和瞬时沉默对BR诱导的抗氧化防护酶活性的影响 | 第58-61页 |
| 3. 讨论 | 第61-62页 |
| 第三节 BR诱导的抗氧化防护中ZmMAP65-1a与H_2O_2的关系 | 第62-74页 |
| 1. 材料与方法 | 第63-65页 |
| ·植物材料处理 | 第63-64页 |
| ·定量PCR引物设计 | 第64页 |
| ·玉米叶片原生质体H202的染色 | 第64页 |
| ·载体构建 | 第64-65页 |
| 2. 结果与分析 | 第65-71页 |
| ·载体构建 | 第65页 |
| ·外源和内源H_2O_2诱导ZmMAP65-1α的表达 | 第65-66页 |
| ·ZmMAP65-1a参与BR诱导的玉米原生质体中H_2O_2的产生 | 第66-68页 |
| ·ZmMAP65-1a通过调节rbohA-D基因表达调节H_2O_2的积累 | 第68-71页 |
| 3. 讨沦 | 第71-74页 |
| 第三章 ZmMAP65-1a与ZmMPK5相互作用参与BR诱导的抗氧化防护 | 第74-86页 |
| 1. 材料与方法 | 第75-79页 |
| ·供试材料 | 第75页 |
| ·载体构建 | 第75-76页 |
| ·引物设计 | 第76-77页 |
| ·双分子荧光互补(BiFC) | 第77页 |
| ·SDS-PAGE和Western-Blot | 第77页 |
| ·抗体的制备 | 第77-78页 |
| ·GST融合蛋白的表达及纯化 | 第78页 |
| ·蛋白提取 | 第78页 |
| ·免疫沉淀 | 第78页 |
| ·凝胶激酶分析 | 第78-79页 |
| 2. 结果与分析 | 第79-84页 |
| ·ZmMPK5调节BR诱导的ZmMAP65-1a基因的表达 | 第79页 |
| ·ZmMAP65-1a与ZmMPK5在BR诱导的抗氧化防护中的关系 | 第79页 |
| ·BIFC验证ZmMAP65-1a与ZmMPK5互作 | 第79-80页 |
| ·ZmMPK5磷酸化ZmMAP65-1a | 第80-84页 |
| 3. 讨论 | 第84-86页 |
| 第四章 BR通过ABA诱导ZmMAP65-1a参与抗氧化防护 | 第86-96页 |
| 1. 材料与方法 | 第87页 |
| ·植物材料及处理 | 第87页 |
| ·实验方法 | 第87页 |
| 2. 结果与分析 | 第87-93页 |
| ·ABA、PEG诱导ZmMAP65-1a基因表达的时间进程分析 | 第87-88页 |
| ·ZmMAP65-1a参与ABA诱导的抗氧化防护 | 第88-89页 |
| ·H_2O_2和MAPK参与ABA诱导的ZmMAP65-1a的表达 | 第89-91页 |
| ·ABA参与BR、PEG诱导的ZmMAP65-1a的表达 | 第91页 |
| ·ABA参与BR诱导的NADPH氧化酶基因的表达和ZmMPK5的活化 | 第91-93页 |
| 3. 讨论 | 第93页 |
| 4. 小结 | 第93-96页 |
| 第五章 NaCl、PEG通过ABA调节玉米转录因子ZmNAC影响抗氧化防护 | 第96-130页 |
| 第一节 玉米转录因子ZmNAC的结构特性和表达特性分析 | 第96-113页 |
| 1. 材料与方法 | 第97-102页 |
| ·供试材料 | 第97-98页 |
| ·目标基因的序列分析 | 第98页 |
| ·荧光定量RT-PCR引物设计 | 第98-99页 |
| ·载体构建 | 第99-100页 |
| ·玉米原生质体分离及转化 | 第100页 |
| ·ZmNAC转录激活活性分析及转录激活域的确定 | 第100-101页 |
| ·凝胶迁移实验(EMSA) | 第101-102页 |
| 2. 结果与分析 | 第102-111页 |
| ·目标基因的序列分析 | 第102-104页 |
| ·亚细胞定位 | 第104-105页 |
| ·ZmNAC转录激活活性分析 | 第105-107页 |
| ·ZmNAC结合的顺式作用元件分析 | 第107-108页 |
| ·ZmNAC的表达特性分析 | 第108-111页 |
| 3. 讨论 | 第111-113页 |
| 第二节 NaCl、PEG通过ABA调节ZmNAC影响抗氧化防护 | 第113-130页 |
| 1. 材料与方法 | 第114-116页 |
| ·植物材料及处理 | 第114页 |
| ·引物设计 | 第114-115页 |
| ·载体构建 | 第115-116页 |
| ·实验方法 | 第116页 |
| 2. 结果与分析 | 第116-126页 |
| ·ZmNAC参与ABA诱导的抗氧化防护 | 第116-120页 |
| ·ZmNAC参与ABA诱导的H_2O_2信号途径 | 第120-124页 |
| ·ZmNAC通过ABA响应NaCl、PEG非生物胁迫 | 第124-126页 |
| 3 讨论 | 第126-130页 |
| 第六章 ZmNAC与ZmCCaMK相互作用参与ABA诱导的抗氧化防护 | 第130-152页 |
| 1. 材料与方法 | 第131-135页 |
| ·供试材料 | 第131页 |
| ·载体构建 | 第131-132页 |
| ·引物设计 | 第132-133页 |
| ·ZmNAC底物磷酸化 | 第133-134页 |
| ·ZmNAC磷酸化位点预测及点突变 | 第134-135页 |
| 2. 结果与分析 | 第135-148页 |
| ·BIFC验证ZmCCaMK与ZmNAC互作 | 第135-137页 |
| ·ZmCCaMK调节ABA诱导的ZmNAC基因的表达 | 第137-139页 |
| ·ZmCCaMK与ZmNAC在ABA诱导的抗氧化防护中的关系 | 第139-141页 |
| ·ZmCCaMK与ZmNAC对玉米原生质体中H_2O_2产生的影响 | 第141-142页 |
| ·底物磷酸化 | 第142-143页 |
| ·ZmNAC磷酸化位点预测及点突变 | 第143-145页 |
| ·ZmCCaMK与ZmNAC相关Mutant在ABA诱导的抗氧化防护中的作用 | 第145-148页 |
| 3. 讨论 | 第148-152页 |
| 第七章 ZmNAC转基因烟草抗逆性分析 | 第152-164页 |
| 1. 材料与方法 | 第153-156页 |
| ·供试材料 | 第153页 |
| ·引物设计 | 第153页 |
| ·烟草转基因载体super1300-ZmNAC的构建 | 第153页 |
| ·ZmNAC抗体制备 | 第153-154页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第154-155页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第155-156页 |
| 2. 结果与分析 | 第156-161页 |
| ·烟草转基因载体super1300-ZmNAC的构建 | 第156页 |
| ·过表达ZmNAC转基因烟草的获得 | 第156-157页 |
| ·过表达ZmNAC转基因烟草的检测 | 第157-159页 |
| ·ZmNAC的过表达转基因烟草对干旱和盐胁迫的耐受性表型分析 | 第159-160页 |
| ·ZmNAC的过表达转基因烟草相关抗逆基因表达分析 | 第160-161页 |
| 3. 讨论 | 第161页 |
| 4. 小结 | 第161-164页 |
| 第八章 全文结论 | 第164-168页 |
| 1 研究小结 | 第164-165页 |
| ·BR通过ABA诱导ZmMAP65-1a参与抗氧化防护 | 第164页 |
| ·H_2O__2在ZmMAP65-1a参与的BR诱导的ABA上调引起的抗氧化防护中发挥重要的作用 | 第164页 |
| ·ZmMAP65-1a与ZmMAPK5相互作用参与BR诱导的ABA上调引起的抗氧化防护 | 第164页 |
| ·ZmNAC参与ABA诱导的抗氧化防护 | 第164-165页 |
| ·ZmNAC参与ABA诱导的H_2O_2信号途径 | 第165页 |
| ·NaCl、PEG通过ABA调节ZmNAC的表达 | 第165页 |
| ·ZmNAC与ZmCCaMK相互作用参与ABA诱导的抗氧化防护 | 第165页 |
| ·ZmNAC转基因烟草胁迫耐受性增强 | 第165页 |
| 2 创新之处 | 第165-166页 |
| 3 存在的问题与展望 | 第166-168页 |
| 参考文献 | 第168-186页 |
| 致谢 | 第186-188页 |
| 攻读学位期间发表与投送的论文 | 第188页 |
