| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-23页 |
| ·碳酐酶概述 | 第9-11页 |
| ·CA Ⅸ的发现 | 第11-12页 |
| ·CA Ⅸ的结构和功能 | 第12页 |
| ·CA Ⅸ与肿瘤 | 第12-16页 |
| ·CA Ⅸ表达的调节 | 第12-14页 |
| ·CA Ⅸ对乏氧肿瘤细胞的调节 | 第14-15页 |
| ·CA Ⅸ与肿瘤的诊断治疗及预后 | 第15-16页 |
| ·CA Ⅸ小分子抑制剂的研究进展 | 第16-22页 |
| ·虚拟筛选发现CA Ⅸ抑制剂 | 第16-17页 |
| ·CA Ⅸ荧光探针类抑制剂 | 第17-18页 |
| ·CA Ⅸ新型的磺胺类抑制剂 | 第18-20页 |
| ·CA Ⅸ香豆素类抑制剂 | 第20-21页 |
| ·CA Ⅸ其他类型的抑制剂 | 第21-22页 |
| ·本文研究思路 | 第22-23页 |
| 第2章 材料与方法 | 第23-39页 |
| ·实验材料 | 第23-24页 |
| ·菌株、质粒和细胞株 | 第23页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·仪器设备 | 第24页 |
| ·CA Ⅸ表达纯化的溶液配制 | 第24-25页 |
| ·培养基的配制 | 第24页 |
| ·表达纯化CA Ⅸ时缓冲液的配制 | 第24-25页 |
| ·细胞培养溶液配制 | 第25-26页 |
| ·Western Blot溶液配制 | 第26页 |
| ·常规方法 | 第26-28页 |
| ·质粒小提 | 第26页 |
| ·核酸电泳 | 第26-27页 |
| ·BL21感受态细胞制备 | 第27页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-39页 |
| ·基于结构的虚拟筛选 | 第28-30页 |
| ·pGEX-4T-1-CA Ⅸ重组质粒的构建 | 第30-32页 |
| ·pGEX-4T-1-CA Ⅸ的纯化 | 第32-33页 |
| ·停流仪进行碳酐酶抑制剂的筛选 | 第33-35页 |
| ·细胞培养 | 第35页 |
| ·MTT assay | 第35-36页 |
| ·Western Blot | 第36-38页 |
| ·酶标仪测定阳性化合物AZA和EZA对CA Ⅰ和CA Ⅱ的IC_(50) | 第38-39页 |
| 第3章 结果与讨论 | 第39-50页 |
| ·虚拟筛选 | 第39页 |
| ·蛋白表达纯化 | 第39-40页 |
| ·停流仪进行碳酐酶Ⅸ抑制剂的筛选 | 第40-44页 |
| ·GST对CA Ⅸ测活体系的影响 | 第40页 |
| ·阳性化合物AZA和EZA对CAⅠ、CAⅡ、CA Ⅸ的IC_(50) | 第40-41页 |
| ·化合物对CAⅠ、CA Ⅱ、CA Ⅸ的IC_(50) | 第41-44页 |
| ·化合物的对接构象分析 | 第44-46页 |
| ·化合物对乏氧肿瘤细胞的增殖抑制 | 第46-47页 |
| ·Western Blot结果 | 第47页 |
| ·酶标仪进行CAⅠ和CAⅡ抑制剂筛选方法的建立 | 第47-50页 |
| 第4章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-59页 |
| 发表论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
