| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-16页 |
| 1.杆状病毒细胞凋亡抑制基因研究现状及其背景 | 第13-14页 |
| ·家蚕杆状病毒（BmNPV）概述 | 第13页 |
| ·杆状病毒细胞凋亡抑制基因研究现状 | 第13-14页 |
| ·家蚕杆状病毒凋亡抑制基因研究进展 | 第14页 |
| 2 Red重组技术介绍 | 第14-15页 |
| 3 酵母单杂交技术介绍 | 第15-16页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第16-19页 |
| 1 研究目的及意义 | 第16页 |
| 2 研究主要内容 | 第16-18页 |
| 3 实验流程图 | 第18-19页 |
| 第三章 BmNPV iap1、iap2 基因缺失型和补回型病毒的构建 | 第19-30页 |
| 1 材料和试剂 | 第19页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·试剂 | 第19页 |
| ·试剂的配置 | 第19页 |
| 2 方法 | 第19-26页 |
| ·iap1、iap2 缺失型病毒的构建原理 | 第19页 |
| ·含有pKD46 质粒的DH10Bac菌株感受态细胞的制备 | 第19-20页 |
| ·iap1、iap2 基因打靶片段的制备 | 第20-21页 |
| ·iap1、iap2 缺失型病毒的获得 | 第21页 |
| ·iap1、iap2 基因缺失型bacmid的PCR鉴定 | 第21-22页 |
| ·构建转移载体pFast BacHtb-iap1 和pFastBacHtb-iap2 | 第22-25页 |
| ·PCR扩增iap1 和iap2 基因 | 第22-23页 |
| ·目的片段与载体的双酶切 | 第23页 |
| ·目的片段与转移载体的双酶切产物连接 | 第23-24页 |
| ·连接产物转化TG1 感受态 | 第24页 |
| ·重组质粒pFastBacHtb-iap1，pFastBacHtb-iap2 的鉴定 | 第24-25页 |
| ·iap1、iap2 基因补回型病毒的构建 | 第25-26页 |
| ·制备含iap1 和iap2 缺失型病毒的DH10Bac感受态细胞 | 第25页 |
| ·重组转移载体pFastBacHtb-iap1 和pFastBacHtb-iap2 的转化13 2.7.3 阳性重组克隆的筛选 | 第25页 |
| ·阳性重组克隆的筛选 | 第25-26页 |
| ·iap1、iap2 基因补回型病毒的PCR鉴定 | 第26页 |
| 3 结果 | 第26-29页 |
| ·iap1、iap2 基因敲除型病毒的鉴定 | 第26-28页 |
| ·iap1、iap2 补回型病毒的鉴定 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 第四章 iap1、iap2 基因缺失对家蚕细胞凋亡的影响 | 第30-35页 |
| 1.材料与试剂 | 第30页 |
| ·材料： | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| 2. 方法 | 第30-32页 |
| ·病毒基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·病毒滴度检测 | 第31页 |
| ·病毒DNA转染BmN细胞 | 第31页 |
| ·病毒滴度检测 | 第31页 |
| ·BmN细胞基因组DNA片段化检测 | 第31-32页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第32-33页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第32页 |
| ·细胞DNA片段化检测结果 | 第32-33页 |
| 4. 讨论 | 第33-35页 |
| 第五章 iap1 缺失对BmNPV病毒复制的影响 | 第35-40页 |
| 1. 材料与试剂 | 第35页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| 2. 方法 | 第35-38页 |
| ·bacmid提取 | 第35-36页 |
| ·iap1-ko-bacmid、iap1-re-bacmid 以及 wt-bacmid 三种病毒的获取 | 第36页 |
| ·病毒基因组的提取和消化 | 第36-37页 |
| ·病毒基因组的提取 | 第36-37页 |
| ·荧光定量PCR分析 | 第37-38页 |
| ·引物设计： | 第37页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线的绘制 | 第37页 |
| ·q-PCR反应 | 第37-38页 |
| 3. 结果与分析 | 第38-39页 |
| ·q-PCR标准曲线的绘制 | 第38页 |
| ·病毒基因组复制的qPCR分析 | 第38-39页 |
| 4. 讨论 | 第39-40页 |
| 第六章 iap1 缺失对BmNPV病毒基因转录的影响 | 第40-46页 |
| 1. 实验材料与试剂 | 第40页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| 2. 方法 | 第40-42页 |
| ·荧光定量PCR引物的设计 | 第40-41页 |
| ·总RNA提取 | 第41页 |
| ·逆转录合成cDNA第一链 | 第41页 |
| ·荧光定量PCR | 第41-42页 |
| ·荧光定量PCR数据的分析 | 第42页 |
| 3. 结果 | 第42-45页 |
| ·早期基因lef-3 转录水平的q-PCR分析 | 第42-43页 |
| ·病毒晚期基因vp39 转录的qPCR分析 | 第43-44页 |
| ·病毒极晚期基因p10 转录的qPCR分析 | 第44-45页 |
| 4. 讨论 | 第45-46页 |
| 第七章 BmNPV iap2 基因启动子结合蛋白的筛选 | 第46-59页 |
| 1. 材料和试剂 | 第46-47页 |
| ·材料 | 第46页 |
| ·试剂 | 第46-47页 |
| 2. 方法 | 第47-55页 |
| ·诱饵片段合成 | 第47页 |
| ·重组质粒p113-AbAi的构建 | 第47-48页 |
| ·诱饵片段和酵母质粒的双酶切 | 第47页 |
| ·割胶回收产物的连接 | 第47-48页 |
| ·用CaCl2法将连接产物转化大肠杆菌TG1 菌株 | 第48页 |
| ·重组质粒p113-AbAi的筛选与鉴定 | 第48页 |
| ·酵母诱饵报告子的构建 | 第48-50页 |
| ·重组诱饵质粒的BbsⅠ单酶切 | 第48页 |
| ·酵母感受态细胞制备 | 第48-49页 |
| ·线性化诱饵质粒转化酵母感受态细胞 | 第49页 |
| ·酵母诱饵报告子PCR鉴定 | 第49-50页 |
| ·酵母诱饵报告子的AbAr最小抑制浓度测定 | 第50页 |
| ·酵母单杂交系统cDNA AD融合表达文库（cDNA AD fusion library）的构建 | 第50-54页 |
| ·感染BmNPV第5天的家蚕五龄幼虫脂肪体组织总RNA的提取 | 第50-51页 |
| ·家蚕脂肪体组织mRNA的纯化 | 第51-52页 |
| ·家蚕脂肪体组织mRNA的浓缩 | 第52页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第52-53页 |
| ·SMART双链cDNA合成 | 第53页 |
| ·SMART双链cDNA的纯化 | 第53-54页 |
| ·利用酵母单杂交系统筛选iap2 基因启动子结合蛋白 | 第54页 |
| ·阳性克隆的鉴定并进行测序分析 | 第54-55页 |
| ·酵母质粒提取方法： | 第54-55页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定及测序 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-58页 |
| ·重组质粒p113-AbAi的双酶切鉴定 | 第55-56页 |
| ·酵母诱饵报告子构建的PCR鉴定 | 第56页 |
| ·酵母单杂交cDNA文库的构建 | 第56-57页 |
| ·酵母单杂交系统对cDNA AD融合表达文库进行筛选 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
