| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一部分 实验研究 | 第14-62页 |
| 第一章 Cx40和Cx43基因在绒山羊毛囊相关细胞及皮肤毛囊周期性变化的表达验证 | 第14-30页 |
| 1 引言 | 第14-15页 |
| 2 材料 | 第15-16页 |
| ·主要材料 | 第15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15-16页 |
| ·分子实验所用 | 第15页 |
| ·细胞实验所用 | 第15-16页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第16页 |
| ·分子实验所用 | 第16页 |
| ·细胞实验所用 | 第16页 |
| 3 方法 | 第16-20页 |
| ·分离及培养三种绒山羊毛囊相关细胞 | 第16-17页 |
| ·分离及培养初级毛乳头细胞 | 第16-17页 |
| ·分离及培养次级毛乳头细胞 | 第17页 |
| ·分离及培养表皮细胞 | 第17页 |
| ·验证三种绒山羊毛囊相关细胞Cx40和Cx43基因的表达 | 第17-19页 |
| ·获取三种绒山羊毛囊相关细胞总cDNA | 第17-18页 |
| ·设计Cx40和Cx43基因CDS序列PCR扩增引物 | 第18页 |
| ·检测三种绒山羊毛囊相关细胞Cx40和Cx43基因表达情况 | 第18-19页 |
| ·验证Cx40和Cx43基因在绒山羊皮肤毛囊静息期和生长期的差异表达 | 第19-20页 |
| ·获取绒山羊皮肤毛囊静息期和生长期的皮样总cDNA | 第19页 |
| ·设计Cx40和Cx43基因及GAPDH内参基因CDS序列qPCR扩增引物 | 第19页 |
| ·检测Cx40和Cx43基因及GAPDH内参基因CDS序列qPCR扩增引物的特异性 | 第19-20页 |
| ·检测绒山羊皮肤毛囊两个时期皮样Cx40和Cx43基因的相对表达量 | 第20页 |
| 4 结果 | 第20-24页 |
| ·分离及培养三种绒山羊毛囊相关细胞的结果 | 第20-22页 |
| ·分离及培养初级毛乳头细胞的结果 | 第20-21页 |
| ·分离及培养次级毛乳头细胞的结果 | 第21页 |
| ·分离及培养表皮细胞的结果 | 第21-22页 |
| ·验证三种绒山羊毛囊相关细胞Cx40和Cx43基因的表达的结果 | 第22页 |
| ·验证Cx40和Cx43基因在绒山羊皮肤毛囊静息期和生长期的差异表达的结果 | 第22-24页 |
| 5 讨论 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-30页 |
| 第二章 Cx40和Cx43基因真核表达载体的构建及绒山羊毛囊相关细胞的转染 | 第30-46页 |
| 1 引言 | 第30-31页 |
| 2 材料 | 第31-32页 |
| ·主要材料 | 第31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·分子实验所用 | 第31页 |
| ·细胞实验所用 | 第31页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第31-32页 |
| ·分子实验所用 | 第31-32页 |
| ·细胞实验所用 | 第32页 |
| 3 方法 | 第32-36页 |
| ·克隆Cx40和Cx43基因CDS序列 | 第32-33页 |
| ·获取绒山羊胎儿成纤维细胞总cDNA | 第32页 |
| ·克隆Cx40和Cx43基因CDS序列 | 第32-33页 |
| ·检测Cx40和Cx43基因CDS序列克隆结果 | 第33页 |
| ·构建插入Cx40和Cx43基因CDS序列的转染载体 | 第33-34页 |
| ·构建pIRES2-EGFP-Cx40和pIRES2-EGFP-Cx43载体 | 第33-34页 |
| ·检测pIRES2-EGFP-Cx40和pIRES2-EGFP-Cx43载体构建结果 | 第34页 |
| ·筛选转Cx40和Cx43基因的细胞系 | 第34页 |
| ·检测转Cx40和Cx43基因的细胞系 | 第34-36页 |
| ·获取6种转基因细胞系和3种非转基因细胞系总cDNA | 第34-35页 |
| ·设计Cx40和Cx43基因CDS序列qPCR扩增引物 | 第35页 |
| ·检测Cx40和Cx43基因CDS序列qPCR扩增引物的特异性 | 第35页 |
| ·检测转基因细胞系与非转基因细胞系Cx40和Cx43基因的相对表达量 | 第35-36页 |
| 4 结果 | 第36-40页 |
| ·克隆Cx40和Cx43基因CDS序列的结果 | 第36-37页 |
| ·构建插入Cx40和Cx43基因CDS序列的载体的结果 | 第37页 |
| ·筛选转Cx40和Cx43基因的细胞系的结果 | 第37-38页 |
| ·检测转Cx40和Cx43基因的细胞系的结果 | 第38-40页 |
| 5 讨论 | 第40-42页 |
| ·克隆Cx40和Cx43基因CDS序列的条件优化 | 第40-41页 |
| ·构建pIRES2-EGFP-Cx40和pIRES2-EGFP-Cx43载体的条件优选 | 第41页 |
| ·细胞转染方式的选择及优化 | 第41-42页 |
| ·转Cx40和Cx43转基因细胞系的检测分析 | 第42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 第三章 Cx40和Cx43基因过表达对参与绒山羊毛囊生长发育相关基因表达影响的检测 | 第46-62页 |
| 1 引言 | 第46-47页 |
| 2 材料 | 第47-48页 |
| ·主要材料 | 第47-48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第48页 |
| 3 方法 | 第48-50页 |
| ·设计检测对照组及被检测基因CDS序列qPCR扩增引物 | 第48-49页 |
| ·检测绒山羊毛囊生长发育相关基因CDS序列qPCR扩增引物的特异性 | 第49页 |
| ·检测6种转基因细胞系与非转基因细胞系绒山羊毛囊生长发育相关基因的相对表达量 | 第49-50页 |
| 4 结果 | 第50-55页 |
| ·基因VEGF转录表达情况 | 第50-51页 |
| ·基因IGF-1转录表达情况 | 第51-52页 |
| ·基因β-catenin转录表达情况 | 第52-53页 |
| ·基因HIF-1α转录表达情况 | 第53-54页 |
| ·基因胸腺素β4转录表达情况 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-58页 |
| ·关于基因VEGF的差异表达 | 第55-56页 |
| ·关于基因IGF-1的差异表达 | 第56-57页 |
| ·关于基因β-catenin的差异表达 | 第57页 |
| ·关于基因HIF-1α的差异表达 | 第57-58页 |
| ·关于基因胸腺素β4的差异表达 | 第58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 结论 | 第62-64页 |
| 图版1 | 第64-66页 |
| 图版2 | 第66-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 文献综述 细胞间隙连接(gapjunction,GJ)的研究进展 | 第70-82页 |
| 1 结构组成 | 第70-72页 |
| 2 功能调节 | 第72-73页 |
| ·电偶联信号传递作用 | 第72页 |
| ·代谢偶联信号传递作用 | 第72-73页 |
| ·调控作用 | 第73页 |
| 3 研究方法 | 第73-74页 |
| ·细胞生物学的研究方法 | 第73-74页 |
| ·分子生物学的研究方法 | 第74页 |
| 4 与人类疾病的联系 | 第74-75页 |
| ·与先天耳聋疾病的联系 | 第74页 |
| ·与心脏疾病的联系 | 第74-75页 |
| ·与肿瘤疾病的联系 | 第75页 |
| 5 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 硕士期间论文发表情况 | 第84页 |
