南海沉积物中酯酶基因克隆表达及酶学性质研究
| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-7页 |
| 引言 | 第7-10页 |
| 第一章 材料与方法 | 第10-27页 |
| ·实验材料 | 第10-11页 |
| ·实验菌株及克隆载体 | 第10页 |
| ·主要实验试剂 | 第10页 |
| ·主要实验仪器 | 第10-11页 |
| ·实验方法 | 第11-27页 |
| ·Fosmid文库筛选试验 | 第11-12页 |
| ·筛选培养基 | 第11页 |
| ·筛选目的菌株的方法 | 第11-12页 |
| ·PCR扩增酯酶基因片段 | 第12-16页 |
| ·从元基因组中扩增酯酶基因 | 第12页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳片段回收 | 第12-13页 |
| ·片段连接 | 第13页 |
| ·转化感受态细胞 | 第13-14页 |
| ·菌液PCR检测 | 第14-15页 |
| ·检测质粒的提取 | 第15-16页 |
| ·酯酶基因重组质粒的构建 | 第16-18页 |
| ·质粒的酶切 | 第16-17页 |
| ·酶切片段与质粒的连接和转化 | 第17-18页 |
| ·诱导表达实验 | 第18-21页 |
| ·蛋白诱导表达 | 第19页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第19-20页 |
| ·大规模发酵及蛋白纯化 | 第20-21页 |
| ·伴侣蛋白促进酯酶的可溶性表达 | 第21-24页 |
| ·酯酶基因重组质粒的制备 | 第21页 |
| ·伴侣蛋白质粒的共转化 | 第21-22页 |
| ·共转化菌株的蛋白诱导表达 | 第22页 |
| ·共转化菌株的蛋白纯化 | 第22-24页 |
| ·酯酶酶学性质的测定 | 第24-27页 |
| ·酯酶活性测定 | 第24页 |
| ·酯酶的最适反应温度 | 第24页 |
| ·酯酶的最适反应pH值 | 第24-25页 |
| ·阳离子对酯酶活性的影响 | 第25页 |
| ·有机溶剂对酯酶活性的影响 | 第25页 |
| ·去垢剂对酯酶活性的影响 | 第25页 |
| ·酯酶热稳定性研究 | 第25页 |
| ·酯酶pH稳定性研究 | 第25-27页 |
| 第二章 结果与分析 | 第27-44页 |
| ·酯酶基因的克隆 | 第27-28页 |
| ·酯酶基因的序列测定 | 第28-30页 |
| ·酯酶基因表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·酯酶的重组表达 | 第33页 |
| ·共转化质粒的提取 | 第33-35页 |
| ·共转化后蛋白的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·重组酯酶的纯化 | 第36-39页 |
| ·酯酶酶学性质 | 第39-44页 |
| ·酯酶活性测定 | 第39页 |
| ·酯酶的最适反应温度 | 第39-40页 |
| ·酯酶的最适反应pH值 | 第40页 |
| ·阳离子对酯酶活性的影响 | 第40-41页 |
| ·有机溶剂对酯酶活性的影响 | 第41-42页 |
| ·去垢剂对酯酶活性的影响 | 第42页 |
| ·酯酶热稳定性研究 | 第42-43页 |
| ·酯酶pH稳定性研究 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-50页 |
| 综述 | 第50-67页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
