| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)概述 | 第12-19页 |
| ·TYLCV的为害情况 | 第12-13页 |
| ·TYLCV的分布与为害 | 第12页 |
| ·TYLCV的发病症状概况 | 第12-13页 |
| ·番茄黄花曲叶病毒的分类 | 第13-16页 |
| ·TYLCV的鉴定方法 | 第16页 |
| ·烟粉虱传毒接种法 | 第16页 |
| ·PCR法 | 第16页 |
| ·血清学检测法 | 第16页 |
| ·分子杂交法 | 第16页 |
| ·TYLCV的防治 | 第16-19页 |
| ·农业防治 | 第16-18页 |
| ·化学药剂防治 | 第18页 |
| ·生物防治 | 第18-19页 |
| 2 RNA沉默概述 | 第19-24页 |
| ·RNA沉默的发现及定义 | 第19页 |
| ·RNA沉默的发现 | 第19页 |
| ·RNA沉默的定义 | 第19页 |
| ·RNA沉默的机制 | 第19-23页 |
| ·dsRNA的产生 | 第20-21页 |
| ·siRNA的形成 | 第21-22页 |
| ·RdRp与siRNA的扩增 | 第22-23页 |
| ·mRNA的降解 | 第23页 |
| ·RNA沉默应用于植物抗病毒的研究 | 第23-24页 |
| 3 抗病育种防治番茄黄化曲叶病毒(TYLCV) | 第24-26页 |
| 4 运用基因工程技术提高植株对TYLCV的抗性 | 第26页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第26-28页 |
| 第二章 TYLCCNV功能基因片段反向重复表达载体的构建 | 第28-48页 |
| 1 试验材料与方法 | 第28-36页 |
| ·试验材料 | 第28-30页 |
| ·质粒、菌株及抗生素 | 第28页 |
| ·试剂盒及酶 | 第28页 |
| ·培养基、试剂 | 第28页 |
| ·试验器材 | 第28-29页 |
| ·PCR引物 | 第29-30页 |
| ·试验方法 | 第30-36页 |
| ·TYLCCNV功能基因目的片段的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第31页 |
| ·DNA片段与载体连接 | 第31-32页 |
| ·连接产物的转化 | 第32页 |
| ·质粒提取 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的筛选与鉴定 | 第33-34页 |
| ·SYBR GreenⅠ电泳 | 第34页 |
| ·DNA酶切反应 | 第34页 |
| ·凝胶快速纯化回收 | 第34-35页 |
| ·含TYLCCNV功能基因片段反向重复结构表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-46页 |
| ·TYLCCNV各功能基因片段的获得 | 第36-39页 |
| ·TYLCCNV各功能基因片段的克隆 | 第39-41页 |
| ·TYLCCNV各功能基因片段反向重复结构表达载体的构建 | 第41-46页 |
| 3 小结与讨论 | 第46-48页 |
| ·小结 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第三章 反向重复表达载体转化本氏烟及其PCR验证 | 第48-62页 |
| 1 试验材料 | 第48-50页 |
| ·菌株及载体 | 第48页 |
| ·供试植物 | 第48页 |
| ·试验试剂 | 第48页 |
| ·试验仪器 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第49-50页 |
| 2 试验方法 | 第50-54页 |
| ·重组表达载体的农杆菌转化 | 第50-51页 |
| ·农杆菌LBA4404感受态的制备 | 第50页 |
| ·冻融法转化农杆菌LBA4404 | 第50页 |
| ·电击法转化农杆菌LBA4404 | 第50-51页 |
| ·本氏烟(N.benthamiana)遗传转化体系的建立 | 第51-54页 |
| ·本氏烟(N.benthamiana)无菌叶片的获得 | 第51页 |
| ·工程菌株的活化 | 第51-52页 |
| ·受体叶片的准备 | 第52页 |
| ·农杆菌侵染 | 第52页 |
| ·共培养 | 第52页 |
| ·脱菌及选择培养 | 第52页 |
| ·分化培养 | 第52页 |
| ·生根培养 | 第52页 |
| ·炼苗和移栽 | 第52-53页 |
| ·抗生素浓度的确定 | 第53页 |
| ·转基因烟草植株的总DNA提取 | 第53-54页 |
| ·转基因烟草植株的PCR鉴定 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-60页 |
| ·含反向重复结构重组载体的农杆菌转化 | 第54-55页 |
| ·组织培养中选择压力的确定 | 第55-56页 |
| ·转基因烟草植株的获得 | 第56-57页 |
| ·转基因烟草植株的总DNA提取 | 第57页 |
| ·转基因烟草植株的PCR检测 | 第57-60页 |
| 4 小结与讨论 | 第60-62页 |
| ·小结 | 第60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 转基因植株攻毒实验的效果 | 第62-65页 |
| 1 试验材料 | 第62页 |
| 2 试验方法 | 第62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-63页 |
| 4 小结与讨论 | 第63-65页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| ·讨论 | 第64-65页 |
| 第五章 结语 | 第65-67页 |
| 1 研究特色 | 第65页 |
| 2 结论 | 第65页 |
| 3 讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 附录A 论文中重要缩写词及中文对照 | 第75-77页 |
| 附录B 常用的抗生素及使用浓度 | 第77-78页 |
| 附录C 常用缓冲液及培养基配方 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81页 |
