| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-39页 |
| ·癌症临床治疗现状及其瓶颈 | 第13-14页 |
| ·RNA干扰类药物在肿瘤治疗中的应用及面临的问题 | 第14-18页 |
| ·纳米药物载体携载小干扰RNA用于肿瘤治疗 | 第18-24页 |
| ·脂质类纳米载体 | 第19-21页 |
| ·脂质体/脂质复合物 | 第19-20页 |
| ·稳定的核苷酸脂质颗粒(stable nucleic acid lipid particle,SNALP) | 第20-21页 |
| ·聚合物类纳米载体 | 第21-23页 |
| ·基于环糊精的纳米颗粒 | 第21页 |
| ·基于壳聚糖的纳米颗粒 | 第21页 |
| ·基于PEI的纳米颗粒 | 第21-22页 |
| ·基于PLGA的纳米颗粒 | 第22页 |
| ·基于树枝状大分子的纳米颗粒 | 第22-23页 |
| ·siRNA键合物 | 第23页 |
| ·siRNA输送体系的选择 | 第23-24页 |
| ·RNA干扰靶点选择 | 第24-26页 |
| ·选题依据 | 第26-29页 |
| 参考文献 | 第29-39页 |
| 第二章 基于阳离子型三嵌段共聚物的Micelleplex输送小干扰RNA用于癌症治疗 | 第39-65页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·实验材料 | 第40-42页 |
| ·主要材料 | 第40页 |
| ·细胞株 | 第40-41页 |
| ·主要药品及试剂 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-49页 |
| ·胶束纳米颗粒(MNPs)的制备 | 第42页 |
| ·动态光散射检测胶束纳米颗粒的粒径分布及表面电位 | 第42页 |
| ·琼脂糖凝胶阻滞实验检验胶束纳米颗粒结合siRNA的能力 | 第42-43页 |
| ·细胞的传代培养 | 第43页 |
| ·负载cy3-siRNA的纳米颗粒细胞内在化能力的研究 | 第43页 |
| ·荧光素酶报告基因检测胶束纳米颗粒输送siRNA沉默目的基因的能力 | 第43-44页 |
| ·PCR检测micelleplex_(siAC)对BT474细胞中AC mRNA表达的影响 | 第44-45页 |
| ·Western Blot检测micelleplex_(siAC)对BT474细胞中AC蛋白表达的影响 | 第45-46页 |
| ·检测micelleplex_(siAc)诱导BT474细胞产生凋亡 | 第46页 |
| ·克隆形成实验检测micelleplex_(siAC)对BT474细胞增殖的影响 | 第46页 |
| ·Micelleplex_(siAC)对乳腺癌细胞中凋亡相关蛋白表达的影响 | 第46-47页 |
| ·BT474原位肿瘤模型建立 | 第47页 |
| ·乳腺癌原位肿瘤的治疗及肿瘤体积测量 | 第47页 |
| ·肿瘤组织中的AC表达水平的检测 | 第47-48页 |
| ·TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡的情况 | 第48页 |
| ·BrdU染色检测肿瘤组织中细胞的增殖情况 | 第48页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA)检测荷瘤裸鼠血清中的免疫因子表达水平 | 第48-49页 |
| ·结果与讨论 | 第49-59页 |
| ·胶束纳米颗粒能有效携载siRNA | 第49-51页 |
| ·胶束纳米颗粒可以携载siRNA进入肿瘤细胞 | 第51页 |
| ·Micelleplex_(siAC)下调报告基因Luciferase的表达 | 第51-53页 |
| ·Micelleplex_(siAC)下调内源性基因酸性神经酰胺酶的表达 | 第53-54页 |
| ·Micelleplex_(siAC)介导乳腺癌细胞的凋亡 | 第54-55页 |
| ·Micelleplex_(siAC)有效抑制原位乳腺癌小鼠肿瘤的生长 | 第55-57页 |
| ·Micelleplex_(siAC)下调肿瘤内源性基因AC的表达 | 第57页 |
| ·免疫组化观察治疗结束后肿瘤的增殖水平以及凋亡水平 | 第57-58页 |
| ·Micelleplex_(siAC)不引起天然免疫反应 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 第三章 混合胶束纳米粒制备的Micelleplex输送siRNA用于非小细胞肺癌的合成致死治疗 | 第65-89页 |
| ·引言 | 第65-67页 |
| ·实验材料 | 第67-69页 |
| ·主要材料 | 第67-68页 |
| ·细胞株 | 第68页 |
| ·主要药品及试剂 | 第68-69页 |
| ·实验方法 | 第69-74页 |
| ·胶束纳米颗粒(MNP)的制备 | 第69页 |
| ·动态光散射检测胶束纳米颗粒的粒径分布及表面电位 | 第69页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳实验检验胶束纳米颗粒与siRNA的结合能力 | 第69-70页 |
| ·细胞的传代培养 | 第70页 |
| ·Realtime PCR检测MNP_(siCDK4)对不同细胞系中CDK4 mRNA表达的影响 | 第70-71页 |
| ·Western Blot检测MNP_(siCDK4)对各细胞中CDK4蛋白表达的影响 | 第71页 |
| ·克隆形成实验检测MNP_(siCDK4)对细胞增殖的影响 | 第71页 |
| ·MTT实验检测MNP_(siCDK4)对各细胞的杀伤效果 | 第71-72页 |
| ·细胞共培养实验检测MNP_(siCDK4)对KRAS突变细胞的选择性杀伤作用 | 第72页 |
| ·A549、H226皮下肿瘤模型的建立 | 第72-73页 |
| ·非小细胞肺癌肿瘤的治疗及肿瘤体积测量 | 第73页 |
| ·肿瘤组织中的CDK4表达水平的检测 | 第73-74页 |
| ·Western blot检测肿瘤组织中KRAS的表达情况 | 第74页 |
| ·Ki-67染色检测肿瘤组织中细胞的增殖情况 | 第74页 |
| ·结果与讨论 | 第74-83页 |
| ·混合胶束纳米颗粒能够有效携载siRNA | 第74-76页 |
| ·胶束纳米颗粒输送siRNA显著下调细胞中CDK4基因的表达 | 第76-77页 |
| ·胶束纳米颗粒输送siCDK4特异性抑制KRAS突变细胞活力 | 第77-78页 |
| ·胶束纳米颗粒输送siCDK4特异性抑制KRAS突变细胞增殖 | 第78-79页 |
| ·MNP_(siCDK4)可特异性抑制KRAS突变非小细胞肺癌肿瘤的生长 | 第79-81页 |
| ·MNP_(siCDK4)下调肿瘤内源性基因CDK4的表达 | 第81-83页 |
| ·免疫组化观察治疗结束后肿瘤的增殖水平以及凋亡水平 | 第83页 |
| ·本章小结 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 附录一 主要仪器设备 | 第89-91页 |
| 附录二 常规试剂 | 第91-93页 |
| 附录三 主要溶液配制 | 第93-97页 |
| 附录四 常规实验方法 | 第97-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第104-106页 |
