| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-23页 |
| 1 研究问题的由来 | 第11页 |
| 2 金鱼外部形态的变异及头瘤的特点 | 第11-15页 |
| ·金鱼的起源及品种选育 | 第11-12页 |
| ·金鱼的性状变异 | 第12-14页 |
| ·金鱼头瘤的分布和形态特征 | 第14页 |
| ·金鱼头瘤的研究现状 | 第14-15页 |
| 3 差异表达基因克隆技术及研究进展 | 第15-19页 |
| ·mRNA差异显示技术(DDRT-PCR) | 第15页 |
| ·cDNA代表性差异分析(RDA) | 第15-16页 |
| ·cDNA扩增片段多样性技术(cDNA-AFLP) | 第16页 |
| ·基因表达系列分析(SAGE) | 第16-17页 |
| ·cDNA芯片技术(cDNA microarray) | 第17页 |
| ·消减抑制杂交(SSH) | 第17-19页 |
| 4 实时荧光定量PCR的原理及数据分析 | 第19-21页 |
| ·实时荧光定量PCR的原理 | 第19-21页 |
| ·相对定量PCR的数据分析方法 | 第21页 |
| ·双标准曲线法 | 第21页 |
| ·2~(-△△CT)法 | 第21页 |
| 5 研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 金鱼头瘤相关基因差减文库的构建及筛选 | 第23-43页 |
| 1 材料与方法 | 第23-34页 |
| ·实验用鱼 | 第23-24页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第24页 |
| ·总RNA的提取和检测 | 第24-25页 |
| ·总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·总RNA的检测 | 第25页 |
| ·SMART cDNA合成 | 第25-26页 |
| ·第一链cDNA反转录 | 第25-26页 |
| ·双链cDNA合成 | 第26页 |
| ·双链cDNA纯化 | 第26页 |
| ·消减抑制杂交 | 第26-30页 |
| ·RsaI酶切 | 第27页 |
| ·接头连接及效率检测 | 第27-28页 |
| ·消减杂交 | 第28-29页 |
| ·抑制PCR | 第29页 |
| ·差减效率检测 | 第29-30页 |
| ·差减产物纯化 | 第30页 |
| ·差减文库的生成 | 第30-31页 |
| ·载体连接 | 第30页 |
| ·细菌转化 | 第30页 |
| ·涂板及细菌培养 | 第30-31页 |
| ·PCR阳性克隆筛选 | 第31页 |
| ·斑点杂交筛选 | 第31-33页 |
| ·探针合成 | 第31-32页 |
| ·探针标记效率检测 | 第32页 |
| ·杂交膜准备及样品固定 | 第32页 |
| ·斑点杂交及显色 | 第32-33页 |
| ·差异表达克隆筛选 | 第33页 |
| ·文库测序及比对分析 | 第33-34页 |
| ·文库测序 | 第33页 |
| ·序列Blast比对 | 第33页 |
| ·基因功能注释 | 第33-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-41页 |
| ·总RNA的检测 | 第34页 |
| ·SMART cDNA的合成 | 第34-35页 |
| ·消减抑制杂交 | 第35-38页 |
| ·RsaI酶切 | 第35-36页 |
| ·Tester cDNA接头连接效率检测 | 第36-37页 |
| ·差减杂交及效率检测 | 第37-38页 |
| ·PCR阳性克隆筛选 | 第38页 |
| ·斑点杂交筛选 | 第38-39页 |
| ·文库序列测定 | 第39页 |
| ·文库序列比对分析 | 第39-41页 |
| ·文库序列Blast比对 | 第39-40页 |
| ·文库序列注释分类 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| ·实验金鱼品种的选择及组织取样 | 第41页 |
| ·cDNA文库构建的影响因素 | 第41页 |
| ·关于文库序列功能分类注释 | 第41-43页 |
| 第三章 金鱼头瘤功能基因的分类注释及表达分析 | 第43-52页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·实验材料 | 第43页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第43-44页 |
| ·总RNA的提取及反转录 | 第44页 |
| ·总RNA的提取 | 第44页 |
| ·第一链cDNA反转录 | 第44页 |
| ·金鱼头瘤功能基因的半定量鉴定 | 第44-45页 |
| ·假定功能基因的选择 | 第44-45页 |
| ·特异引物设计 | 第45页 |
| ·功能基因不同组织间的半定量分析 | 第45页 |
| ·金鱼头瘤功能基因的荧光定量分析 | 第45-46页 |
| ·功能基因的荧光定量分析 | 第45-46页 |
| ·数据处理 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-49页 |
| ·金鱼头瘤功能基因不同组织间的半定量分析 | 第46-47页 |
| ·金鱼头瘤功能基因不同时相的定量分析 | 第47-49页 |
| 3 讨论 | 第49-52页 |
| ·金鱼头瘤功能基因在组织生长过程中的表达变化及其功能 | 第49-51页 |
| ·金鱼头瘤形成机制的预测 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 附录1 | 第60-63页 |
| 附录2 | 第63-66页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附件 | 第68页 |
