| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| ·甘草酸及其衍生物 | 第12-14页 |
| ·甘草酸及其衍生物的结构，性质 | 第12页 |
| ·甘草酸及其衍生物的应用 | 第12-13页 |
| ·单葡萄糖醛酸基甘草次酸（GAMG）的制备 | 第13-14页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶 | 第14-16页 |
| ·β-葡糖醛酸苷酶的来源及功能 | 第14-15页 |
| ·β-葡糖醛酸苷酶催化机理 | 第15-16页 |
| ·酶分子定向进化研究进展 | 第16-19页 |
| ·定向进化概述 | 第16-17页 |
| ·定向进化的方法 | 第17-18页 |
| ·高通量筛选策略 | 第18-19页 |
| ·酶分子定向进化应用 | 第19页 |
| ·核酸适配体发展现状 | 第19-23页 |
| ·核酸适配体的筛选技术（SELEX 技术） | 第20-21页 |
| ·核酸适配体的筛选方法 | 第21-22页 |
| ·核酸适体配的应用与展望 | 第22-23页 |
| ·论文研究的意义及技术路线 | 第23-25页 |
| ·论文研究的意义 | 第23-24页 |
| ·技术路线 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·材料 | 第25-28页 |
| ·菌株和质粒 | 第25页 |
| ·药品及试剂 | 第25-26页 |
| ·溶液与培养基 | 第26-27页 |
| ·仪器设备 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-35页 |
| ·菌体培养与质粒的提取 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·基因克隆相关分子操作方法 | 第29-30页 |
| ·易错 PCR 法构建突变体文库 | 第30页 |
| ·突变体的筛选过程 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白的诱导表达、纯化 | 第31页 |
| ·SELEX 筛选过程 | 第31-32页 |
| ·DNA 随机文库的构建与引物合成 | 第32页 |
| ·PCR 条件优化与单链 DNA 的制备 | 第32-34页 |
| ·克隆测序及二级结构分析 | 第34页 |
| ·适配体捕获靶分子 | 第34-35页 |
| ·分析方法 | 第35-37页 |
| ·β-葡萄糖醛酸苷酶活力测定 | 第35页 |
| ·定性与定量分析甘草酸及其衍生物 | 第35页 |
| ·蛋白质和核酸浓度测定方法 | 第35-36页 |
| ·ssDNA 与靶分子结合率测定 | 第36-37页 |
| 第三章 β-葡萄糖醛酸苷酶对甘草酸键选择性的改造 | 第37-50页 |
| 引言 | 第37页 |
| ·易错 PCR 法构建突变体文库 | 第37-40页 |
| ·易错 PCR 条件优化 | 第38-39页 |
| ·原核表达质粒 pET-28a（+）- ep-pgus 的构建 | 第39-40页 |
| ·突变体的筛选过程 | 第40-41页 |
| ·突变酶 PGUS-E(M51)的纯化 | 第41-42页 |
| ·突变体酶学特性分析 | 第42-46页 |
| ·最适 pH 值 | 第43页 |
| ·最适温度 | 第43-44页 |
| ·热稳定性分析 | 第44-45页 |
| ·突变酶定向转化生成 GAMG 的研究 | 第45-46页 |
| ·酶活力测定 | 第46页 |
| ·突变酶基因水平分析 | 第46-48页 |
| ·PGUS-E(M51)与 PGUS-E 氨基酸序列比对分析 | 第47页 |
| ·突变酶三维结构模拟分析 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 第四章 β-葡萄糖醛酸苷酶 DNA 适配体的筛选 | 第50-64页 |
| 引言 | 第50页 |
| ·SELEX 筛选实验流程图 | 第50-52页 |
| ·靶分子蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·PCR 条件的优化 | 第53-55页 |
| ·PCR 扩增程序循环轮数 | 第54页 |
| ·PCR 扩增退火温度 | 第54-55页 |
| ·PCR 体系中模板添加量 | 第55页 |
| ·ssDNA 再生条件的优化 | 第55-57页 |
| ·每轮筛选结果 | 第57-59页 |
| ·SELEX 筛选产物的克隆测序 | 第59-60页 |
| ·适配体序列及二级结构分析 | 第60-62页 |
| ·适配体捕获、固定 PGUS-E | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第五章 结论与展望 | 第64-66页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| ·展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 作者简介 | 第76-77页 |
| 导师评阅表 | 第77页 |