沉默膨胀素基因对乌拉尔甘草悬浮细胞的影响
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 1 前言 | 第9-28页 |
| ·植物细胞悬浮培养概述 | 第9-11页 |
| ·植物悬浮细胞培养应用 | 第9-11页 |
| ·植物悬浮培养中存在的问题 | 第11页 |
| ·膨胀素(expansin) | 第11-21页 |
| ·膨胀素的发现 | 第11-13页 |
| ·膨胀素结构 | 第13-14页 |
| ·膨胀素功能 | 第14-17页 |
| ·膨胀素基因概述 | 第17-18页 |
| ·膨胀素基因调控机理 | 第18-21页 |
| ·甘草概述 | 第21-23页 |
| ·甘草的药理作用 | 第21-23页 |
| ·基因RNA干涉的应用 | 第23-26页 |
| ·RNA干涉在植物基因功能研究中的应用 | 第23-24页 |
| ·RNA干涉在植物抗病毒研究中的应用 | 第24页 |
| ·RNA干涉在作物品种改良中的应用 | 第24-25页 |
| ·RNA沉默在其他方面的应用 | 第25-26页 |
| ·RNA干涉DNA片段的构建概述 | 第26页 |
| ·本课题的研究目的、内容和意义 | 第26-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-39页 |
| ·实验材料 | 第28-32页 |
| ·菌种和乌拉尔甘草 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·实验仪器及设备 | 第29-30页 |
| ·溶液 | 第30-31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-39页 |
| ·抗生素敏感性试验 | 第32-33页 |
| ·膨胀素基因同源性比较 | 第33-34页 |
| ·DNA合成及引物设计 | 第34页 |
| ·质粒提取及酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞制备 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增 | 第36页 |
| ·连接、转化 | 第36-37页 |
| ·CTAB法提取DNA | 第37页 |
| ·膨胀素蛋白的提取 | 第37页 |
| ·转化体的获得 | 第37-38页 |
| ·转化体与非转化体比较 | 第38-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-61页 |
| ·抗生素敏感性试验 | 第39页 |
| ·DNA片段及引物设计 | 第39-40页 |
| ·DNA干涉片段的构建与克隆 | 第40-45页 |
| ·构建思路与目标 | 第40-41页 |
| ·两片段连接及PCR筛选 | 第41-42页 |
| ·四片段DNA连接 | 第42-43页 |
| ·靶标序列与pUC19-T载体连接 | 第43-45页 |
| ·表达载体构建 | 第45-48页 |
| ·构建路线与目标 | 第45-46页 |
| ·靶标序列与Pcambia2300连接 | 第46-48页 |
| ·农杆菌转化及鉴定 | 第48-50页 |
| ·农杆菌转化 | 第48-49页 |
| ·EHA105鉴定 | 第49-50页 |
| ·转化体的获得 | 第50-56页 |
| ·外植体预培养 | 第50-51页 |
| ·共培养 | 第51-52页 |
| ·转化条件优化 | 第52-54页 |
| ·选择培养 | 第54-56页 |
| ·转化体与非转化体比较 | 第56-61页 |
| ·愈伤组织生长分析 | 第56-57页 |
| ·悬浮细胞生长曲线的绘制 | 第57-58页 |
| ·悬浮细胞观察 | 第58-59页 |
| ·膨胀素蛋白鉴定 | 第59-60页 |
| ·悬浮细胞PCR检测 | 第60-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 5 展望 | 第62-63页 |
| 6 参考文献 | 第63-71页 |
| 7 论文发表情况 | 第71-72页 |
| 8 致谢 | 第72页 |
