| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 上篇 文献综述 | 第11-29页 |
| 第一章 彩色马蹄莲细菌性软腐病的研究进展 | 第12-24页 |
| 1 彩色马蹄莲细菌性软腐病的概述 | 第12-13页 |
| ·病原 | 第12-13页 |
| ·病害症状 | 第13页 |
| ·病原菌的传播 | 第13页 |
| 2 病原菌的致病过程 | 第13-14页 |
| 3 彩色马蹄莲细菌性软腐病的防治 | 第14-16页 |
| ·农业防治 | 第14-15页 |
| ·选种无病材料 | 第15页 |
| ·选育抗性品种 | 第15-16页 |
| ·化学防治 | 第16页 |
| ·生物防治 | 第16页 |
| 4 病原菌的致病机理 | 第16-24页 |
| ·病原菌的致病因子 | 第17-19页 |
| ·黏附素和生物膜的形成 | 第19页 |
| ·胞外多糖和脂多糖 | 第19-21页 |
| ·游动性 | 第21页 |
| ·对活性氧的抗性 | 第21-22页 |
| ·植物毒素 | 第22页 |
| ·hrp基因 | 第22-24页 |
| 第二章 Clp蛋白酶的研究进展 | 第24-29页 |
| 1 各种生物的Clp蛋白 | 第24-25页 |
| 2 Clp蛋白酶的结构 | 第25-26页 |
| 3 Clp蛋白酶的作用机制 | 第26页 |
| 4 Clp蛋白酶生物学功能 | 第26-29页 |
| ·Clp蛋白酶控制胞内蛋白质的质量 | 第27-28页 |
| ·Clp蛋白可影响细菌的毒力 | 第28-29页 |
| 下篇 研究内容 | 第29-76页 |
| 第一章 胡萝卜软腐果胶杆菌中clpP基因的功能分析 | 第30-62页 |
| 摘要 | 第30-31页 |
| 1 试验材料 | 第31-34页 |
| ·供试菌株和质粒 | 第31-32页 |
| ·培养基及抗生素 | 第32-33页 |
| ·引物 | 第33-34页 |
| 2 试验方法 | 第34-48页 |
| ·质粒的提取 | 第34-35页 |
| ·细菌基因组DNA的大量提取 | 第35-36页 |
| ·DNA凝胶电泳及DNA片段浓度、大小测算 | 第36页 |
| ·DNA酶切、连接和PCR产物回收 | 第36页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第36-37页 |
| ·Southern杂交 | 第37-41页 |
| ·clpP缺失突变体的构建 | 第41-43页 |
| ·互补菌株的构建及验证 | 第43页 |
| ·细胞形态和鞭毛观察 | 第43页 |
| ·游动性试验 | 第43页 |
| ·细菌沉降性试验 | 第43-44页 |
| ·胞外酶的检测 | 第44页 |
| ·生物膜的检测 | 第44-45页 |
| ·生长曲线测定 | 第45页 |
| ·突变体抗氧化压力测定 | 第45页 |
| ·致病性和过敏性反应测定 | 第45-46页 |
| ·体内定殖能力测定 | 第46页 |
| ·总RNA的提取及qRT-PCR检测 | 第46-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-60页 |
| ·clpP上下游片段基因的克隆 | 第48页 |
| ·clpP突变株的构建 | 第48-50页 |
| ·互补菌株的构建 | 第50-51页 |
| ·clpP基因突变不影响PccS1鞭毛合成和运动性 | 第51-52页 |
| ·clpP基因突变后不产生沉降现象 | 第52页 |
| ·clpP基因突变后影响胞外蛋白酶、果胶酶和纤维素酶的产生 | 第52-53页 |
| ·clpP基因突变降低了生物膜的产生 | 第53-54页 |
| ·不同培养基上clpP基因的突变影响PccS1正常生长 | 第54-55页 |
| ·随着温度升高clpP基因的突变影响PccS1正常生长 | 第55-56页 |
| ·clpP基因突变降低PccS1抗氧化压力能力 | 第56页 |
| ·clpP基因突变影响PccS1致病性,但不影响过敏性反应 | 第56-58页 |
| ·clpP基因突变影响菌株在大白菜体内增殖能力 | 第58-59页 |
| ·qRT-PCR检测结果 | 第59-60页 |
| 4 讨论与结论 | 第60-62页 |
| 第二章 胡萝卜软腐果胶杆菌中aspA、hsl和ugpB基因的功能分析 | 第62-76页 |
| 摘要 | 第62-63页 |
| 1 试验材料 | 第63-65页 |
| ·供试菌株和质粒 | 第63-64页 |
| ·培养基及抗生素 | 第64-65页 |
| ·引物 | 第65页 |
| 2 试验方法 | 第65-68页 |
| ·质粒的提取 | 第65-66页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第66页 |
| ·DNA凝胶电泳及DNA片段浓度、大小测算 | 第66页 |
| ·DNA酶切、连接和PCR产物回收 | 第66页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第66页 |
| ·缺失突变体的构建 | 第66-67页 |
| ·过表达菌株的构建及验证 | 第67页 |
| ·游动性试验 | 第67页 |
| ·细菌沉降性试验 | 第67-68页 |
| ·胞外酶的检测 | 第68页 |
| ·生物膜的检测 | 第68页 |
| ·生长曲线测定 | 第68页 |
| ·致病性的测定 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-73页 |
| ·aspA、hsl和ugpB基因的克隆 | 第68-69页 |
| ·aspA、hsl和ugpB基因突变株的构建 | 第69-70页 |
| ·aspA、hsl和ugpB基因过表达菌株的构建 | 第70页 |
| ·aspA、hsl和ugpB基因突变不影响PccS1的游动性 | 第70-71页 |
| ·aspA、hsl和ugpB基因突变后不产生沉降现象 | 第71页 |
| ·aspA、hsl和ugpB基因突变后不影响胞外酶的产生 | 第71-72页 |
| ·aspA、hsl和ugpB基因与生物膜的形成无关 | 第72页 |
| ·aspA、hsl和ugpB基因突变不影响PccS1生长能力 | 第72-73页 |
| ·aspA、hsl和ugpB基因突变不影响PccS1致病性 | 第73页 |
| 4 讨论与结论 | 第73-76页 |
| ·aspA基因与胡萝卜软腐果胶杆菌致病性不相关 | 第74页 |
| ·hsl基因与胡萝卜软腐果胶杆菌致病性不相关 | 第74页 |
| ·ugpB基因与胡萝卜软腐果胶杆菌致病性不相关 | 第74-76页 |
| 全文总结 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第86-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
