| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-14页 |
| ·PanD 酶的简述及其产物的应用 | 第7-9页 |
| ·PanD 酶的克隆表达与酶学性质研究现状 | 第9-10页 |
| ·PanD 酶的三维结构 | 第10页 |
| ·PanD 酶的裂解机制 | 第10-11页 |
| ·PanD 酶的催化机理 | 第11-12页 |
| ·本课题的意义和主要的研究内容 | 第12-14页 |
| ·本课题的研究意义 | 第12-13页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-27页 |
| ·材料 | 第14-17页 |
| ·菌种与质粒 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器与设备 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·主要溶液 | 第15-17页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的表达与纯化方法 | 第17-21页 |
| ·谷氨酸棒杆菌基因组 DNA 的提取 | 第17页 |
| ·质粒的提取 | 第17页 |
| ·PCR 引物设计 | 第17页 |
| ·panD 的 PCR 反应体系与 PCR 反应条件 | 第17-18页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第18页 |
| ·重组质粒的构建 | 第18页 |
| ·大肠杆菌高效感受态的制备 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌感受态热击转化方法 | 第19页 |
| ·PCR 鉴定阳性重组质粒 | 第19页 |
| ·双酶切鉴定阳性重组质粒 | 第19-20页 |
| ·DNA 测序检测重组质粒 | 第20页 |
| ·目的蛋白的诱导表达 | 第20页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第20-21页 |
| ·Tris-ticine SDS-PAGE 电泳 | 第21页 |
| ·PanD 的转膜和 N 端测序 | 第21页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的酶学性质分析 | 第21-23页 |
| ·酶活测定方法 | 第21-22页 |
| ·PanD 蛋白最适温度的测定 | 第22页 |
| ·PanD 蛋白最适 pH 的测定 | 第22-23页 |
| ·PanD 蛋白热稳定性的测定 | 第23页 |
| ·重组酶反应动力学参数的测定 | 第23页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的同源建模与定点突变方法 | 第23-27页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的同源建模方法 | 第23页 |
| ·点突变 PCR 引物 | 第23-25页 |
| ·全质粒 PCR 扩增方法 | 第25页 |
| ·全质粒 PCR 产物转化大肠杆菌的方法 | 第25页 |
| ·点突变重组质粒验证及表达方法 | 第25-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-43页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的表达与纯化 | 第27-31页 |
| ·重组质粒 pET24a-panD 的构建 | 第27-29页 |
| ·PanD 重组蛋白的表达 | 第29-30页 |
| ·PanD 重组蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的酶学性质分析 | 第31-34页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的最适温度 | 第31-32页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的最适 pH | 第32页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的热稳定性研究 | 第32-33页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的酶学常数测定 | 第33-34页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的同源结构模拟与自裂解和催化机理解析 | 第34-43页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶的同源建模 | 第34-35页 |
| ·突变点的选取 | 第35-37页 |
| ·各突变体重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·各突变体 PanD 蛋白的自裂解机制解析 | 第38-41页 |
| ·各突变体 PanD 蛋白的催化性质解析 | 第41-43页 |
| 主要结论与展望 | 第43-44页 |
| 主要结论 | 第43页 |
| 展望 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 附录 | 第48-50页 |
| 附录 1 PanD 蛋白β亚基 N 端测序结果 | 第48-50页 |
| 附录 2：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |