| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-18页 |
| ·胰蛋白酶概述 | 第7-9页 |
| ·胰蛋白酶的分布 | 第7页 |
| ·胰蛋白酶的结构、功能及性质 | 第7-8页 |
| ·胰蛋白酶的应用 | 第8-9页 |
| ·胰蛋白酶基因工程的研究进展 | 第9-16页 |
| ·灰色链霉菌胰蛋白酶基因 sprT 的国内外研究现状 | 第9-10页 |
| ·链霉菌表达系统 | 第10-11页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第11-16页 |
| ·立题依据及意义 | 第16-17页 |
| ·主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-26页 |
| ·菌种和质粒 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·试剂、酶、Marker 及相关试剂盒 | 第19页 |
| ·基因克隆操作 | 第19-24页 |
| ·基因组和质粒提取 | 第19-20页 |
| ·目的片段及载体纯化 | 第20页 |
| ·菌落 PCR | 第20页 |
| ·重组表达载体构建 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与 DNA 转化 | 第21-23页 |
| ·变铅青链霉菌原生质体的制备与转化 | 第23页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态的制备与转化 | 第23-24页 |
| ·培养条件 | 第24页 |
| ·重组变铅青链霉菌的培养条件 | 第24页 |
| ·重组枯草芽孢杆菌的培养条件 | 第24页 |
| ·分析方法 | 第24-26页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第24-25页 |
| ·粗酶液的制备 | 第25页 |
| ·胰蛋白酶的纯化方法 | 第25页 |
| ·胰蛋白酶酰胺酶活力的测定 | 第25页 |
| ·胰蛋白酶酯酶活力的测定 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE 检测 | 第25页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-42页 |
| ·灰色链霉菌胰蛋白酶基因 sprT 在变铅青链霉菌中的表达、纯化及培养基优化 | 第26-30页 |
| ·重组质粒 pIJ86-sprT 的构建 | 第26-27页 |
| ·重组工程菌 TK24/pIJ86-sprT 的构建与分泌表达 | 第27-28页 |
| ·重组链霉菌胰蛋白酶(rSGT)的培养基优化 | 第28-29页 |
| ·重组链霉菌胰蛋白酶(rSGT)的分离纯化 | 第29-30页 |
| ·重组链霉菌胰蛋白酶(rSGT)与牛胰蛋白酶(BT)酶学性质的比较 | 第30-33页 |
| ·rSGT 和 BT 最适温度及温度稳定性比较 | 第30-31页 |
| ·rSGT 和 BT 最适 pH 及 pH 稳定性比较 | 第31页 |
| ·rSGT 和 BT 酶反应动力学参数比较 | 第31-32页 |
| ·金属离子对 rSGT 和 BT 活力的影响比较 | 第32页 |
| ·抑制剂和有机溶剂对 rSGT 和 BT 活力的影响比较 | 第32-33页 |
| ·灰色链霉菌胰蛋白酶成熟酶基因 mt 在枯草芽孢杆菌中的表达 | 第33-42页 |
| ·启动子的选择 | 第34-36页 |
| ·信号肽的选择 | 第36-38页 |
| ·融合表达载体的构建与表达 | 第38-39页 |
| ·其他因素的优化 | 第39-42页 |
| 第四章 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| ·主要结论 | 第42页 |
| ·展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
