| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略词 | 第7-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-22页 |
| 1. 启动子研究进展 | 第11-18页 |
| ·启动子基本结构 | 第11-13页 |
| ·起始子 | 第11-12页 |
| ·TATA 盒 | 第12-13页 |
| ·下游启动子元件 | 第13页 |
| ·TFIIB 识别元件 | 第13页 |
| ·上游启动子元件 | 第13页 |
| ·启动子的克隆 | 第13-15页 |
| ·启动子的预测分析 | 第15-16页 |
| ·启动子功能研究方法 | 第16页 |
| ·高低温响应启动子元件研究进展 | 第16-18页 |
| 2. 昆虫抗冻蛋白基因研究进展 | 第18-20页 |
| ·昆虫抗冻蛋白基因表达 | 第18-19页 |
| ·抗冻蛋白基因启动子研究进展 | 第19-20页 |
| 3. 研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二部分 实验部分 | 第22-76页 |
| 第一章 准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白 MpAFP149 基因 5’侧翼区的克隆 | 第22-37页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| 1. 材料及试剂 | 第23页 |
| ·试虫及菌种 | 第23页 |
| ·试剂及测序 | 第23页 |
| ·主要实验仪器 | 第23页 |
| 2. 方法 | 第23-29页 |
| ·特异性引物的设计 | 第23-24页 |
| ·小胸鳖甲基因组的获得 | 第24页 |
| ·PCR 扩增目的序列 | 第24-26页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-Mpafppro 的构建 | 第26-29页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第26-27页 |
| ·第二轮 PCR 回收产物与克隆载体 pMD18-T 的连接 | 第27页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 DH5 | 第27-28页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-Mpafp 阳性克隆的鉴定与测序 | 第28页 |
| ·小胸鳖甲抗冻蛋白基因启动子序列的分析及预测 | 第28-29页 |
| 3. 结果 | 第29-35页 |
| ·小胸鳖甲抗冻蛋白基因组的提取 | 第29页 |
| ·基因组步移 PCR 结果 | 第29-30页 |
| ·PCR 回收结果 | 第30页 |
| ·重组质粒 pMD18-T-Mpafppro 的鉴定 | 第30-31页 |
| ·Mpafppro 的测序及启动子区分析与预测 | 第31-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第二章 小胸鳖甲抗冻蛋白 MpAFP149 基因启动子的表达调控活性研究 | 第37-68页 |
| 引言 | 第37页 |
| 1. 材料及试剂 | 第37-38页 |
| ·载体及菌种 | 第37页 |
| ·试剂及测序 | 第37-38页 |
| ·主要实验仪器 | 第38页 |
| 2. 方法 | 第38-51页 |
| ·设计启动子分段克隆特异性引物 | 第38-39页 |
| ·重组质粒 pCAMBIA1302-Mpafppro 的构建 | 第39-44页 |
| ·Mpafp 启动子不同长度片段的 PCR 扩增 | 第40-41页 |
| ·Mpafp 启动子不同片段的 PCR 扩增产物回收 | 第41页 |
| ·Mpafp 启动子不同片段的 PCR 回收产物的双酶切 | 第41-42页 |
| ·Mpafp 启动子不同片段的 PCR 产物双酶切后回收 | 第42页 |
| ·双酶切回收产物与植物表达载体 pCAMBIA1302 的连接 | 第42页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 DH5 | 第42-43页 |
| ·重组质粒 pCAMBIA1302-Mpafppro 阳性克隆的筛选鉴定及测序 | 第43-44页 |
| ·重组质粒 pCAMBIA1302-Mpafppro 的大量提取和纯化 | 第44-45页 |
| ·基因枪轰击洋葱表皮，观察 pCAMBIA1302-GFP 的瞬时表达 | 第45-46页 |
| ·重组质粒 pGL3-Mpafppro 的构建 | 第46-51页 |
| ·Mpafp 启动子不同片段的 PCR 扩增 | 第47页 |
| ·Mpafp 启动子不同片段的 PCR 扩增产物回收 | 第47页 |
| ·Mpafp 启动子不同片段的 PCR 回收产物的双酶切 | 第47-48页 |
| ·Mpafp 启动子不同片段的 PCR 产物双酶切后回收 | 第48页 |
| ·双酶切回收产物与 pGL3-basic 的连接 | 第48页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 DH5 | 第48-49页 |
| ·重组质粒 pGL3-Mpafppro 阳性克隆的筛选鉴定及测序 | 第49页 |
| ·重组质粒 pGL3-Mpafppro 的大量制备和纯化 | 第49-50页 |
| ·报告基因载体 pGL3-Mpafppro 转染细胞测定荧光素酶活性及数据处理 | 第50-51页 |
| 3. 结果 | 第51-65页 |
| ·重组质粒 pCAMBIA1302-Mpafppro 的构建及活性鉴定 | 第51-56页 |
| ·pMD18-T-Mpafppro4-2 质粒 PCR 及产物回收 | 第51-52页 |
| ·pCAMBIA1302 空载和 PCR 回收产物的双酶切回收结果 | 第52页 |
| ·重组质粒 pCAMBIA1302-Mpafppro 双酶切鉴定结果 | 第52-53页 |
| ·重组质粒 pCAMBIA1302-Mpafppro 测序结果 | 第53-55页 |
| ·重组质粒 pCAMBIA1302-Mpafppro 中 GFP 在洋葱表皮细胞的表达鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组质粒 pGL3-Mpafppro 的构建及活性鉴定 | 第56-65页 |
| ·pMD18-T-Mpafppro4-2 质粒 PCR 产物回收 | 第56-57页 |
| ·pGL3-basic 空载和 PCR 回收产物的双酶切回收结果 | 第57页 |
| ·重组质粒 pGL3-Mpafppro 的双酶切鉴定及测序 | 第57-62页 |
| ·重组质粒 pGL3-Mpafppro 双荧光素酶活性鉴定 | 第62-65页 |
| 4. 讨论 | 第65-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第76-78页 |
| 第四部分 附录 | 第78-82页 |
| 附录 1 常用培养基和试剂 | 第78-81页 |
| 附录 2 个人简历 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
