| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| ·甘油脱水酶概述 | 第9-10页 |
| ·甘油脱水酶的理化性质 | 第9页 |
| ·甘油脱水酶的应用 | 第9-10页 |
| ·3-HPA 概述 | 第10-12页 |
| ·3-HPA 的理化性质 | 第10-11页 |
| ·3-HPA 的应用研究现状 | 第11-12页 |
| ·大肠杆菌表达系统的影响因素 | 第12-13页 |
| ·外源基因本身的特性 | 第12页 |
| ·大肠杆菌的种类 | 第12页 |
| ·不同的培养条件 | 第12-13页 |
| ·启动子介绍 | 第13页 |
| ·本课题的研究意义 | 第13-14页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-23页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·工具酶 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·主要试剂配制 | 第15-16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-23页 |
| ·扩增引物的设计和合成 | 第16-17页 |
| ·gdrB、tac PCR 扩增及 PCR 产物回收 | 第17页 |
| ·质粒提取及大肠杆菌转化 | 第17-18页 |
| ·质粒的构建 | 第18页 |
| ·不同重组大肠杆菌质粒稳定性检验 | 第18页 |
| ·全细胞 SDS-PAGE 电泳[51] | 第18页 |
| ·总 RNA 提取及 DNA 的去除 | 第18-19页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第19页 |
| ·RT-PCR 最适扩增条件优化 | 第19-20页 |
| ·半定量数据分析 | 第20页 |
| ·重组大肠杆菌 3-HPA 的发酵方法 | 第20-21页 |
| ·甘油脱水酶酶活力检测 | 第21页 |
| ·3-HPA 的检测 | 第21页 |
| ·甘油的测定 | 第21-23页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第23-43页 |
| ·不同质粒的构建 | 第23-26页 |
| ·gdrB、tac 启动子基因的克隆 | 第23页 |
| ·质粒 pEtac-dhaB-gdrA-gdrB 的构建 | 第23-24页 |
| ·质粒 pET28a-dhaB-gdrA-gdrB 的构建 | 第24-25页 |
| ·质粒 pUC-tac-dhaB-gdrA-gdrB 的构建 | 第25-26页 |
| ·甘油脱水酶基因不同宿主、不同启动子重组菌表达的差异研究 | 第26-28页 |
| ·不同重组大肠杆菌质粒稳定性研究 | 第26-27页 |
| ·不同甘油脱水酶基因工程菌全细胞 SDS-PAGE 电泳 | 第27-28页 |
| ·不同宿主、不同启动子重组菌甘油脱水酶酶活力检测 | 第28页 |
| ·甘油脱水酶基因不同宿主、不同启动子重组菌转录水平的差异研究 | 第28-33页 |
| ·不同宿主、不同启动子甘油脱水酶基因工程菌总 RNA 的提取 | 第29页 |
| ·内参基因 16S 引物、目的基因 PCR 条件优化 | 第29-31页 |
| ·甘油脱水酶不同宿主、不同启动子重组菌转录水平半定量分析 | 第31-33页 |
| ·不同宿主、不同启动子甘油脱水酶重组菌发酵特性研究 | 第33-43页 |
| ·发酵方法的确定 | 第33-34页 |
| ·重组 E. coli JM109/ pEtac-dhaB-gdrA-gdrB 发酵产 3-HPA 的检测 | 第34-35页 |
| ·重组菌最适发酵时间的确定 | 第35-36页 |
| ·重组 E. coli JM109/pEtac-dhaB-gdrA-gdrB 发酵优化 | 第36-43页 |
| 主要结论与展望 | 第43-45页 |
| 主要结论 | 第43-44页 |
| 展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
