| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-15页 |
| ·TA 克隆 | 第8页 |
| ·常用 T 载体的制备方法 | 第8-9页 |
| ·平末端加 T 法 | 第8-9页 |
| ·脱氧核苷酸末端转移酶(TDT)法 | 第9页 |
| ·限制性内切酶法 | 第9页 |
| ·PCR 法构建 T 载体 | 第9页 |
| ·已报道 T 载体的筛选方法 | 第9-11页 |
| ·蓝白斑筛选 | 第9-10页 |
| ·利用毒蛋白或杀菌肽的筛选方法 | 第10-11页 |
| ·利用红色荧光蛋白的筛选方法 | 第11页 |
| ·利用绿色荧光蛋白的筛选方法 | 第11页 |
| ·常见荧光蛋白及其种类 | 第11-15页 |
| ·绿色荧光蛋白及其突变体 | 第11-13页 |
| ·红色荧光蛋白及其突变体 | 第13-15页 |
| 2 引言 | 第15-16页 |
| ·研究目的和意义 | 第15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-24页 |
| ·材料 | 第16页 |
| ·菌株、质粒 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16页 |
| ·仪器和设备 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-24页 |
| ·绿色荧光蛋白突变体 Emerald 基因的获得 | 第16-17页 |
| ·Emerald 在大肠杆菌表达系统的胞外光谱性质和晶体生长 | 第17-19页 |
| ·Emerald 在大肠杆菌系统中的胞内荧光性质 | 第19-22页 |
| ·利用 Emerald 作为筛选试剂的 T 载体的构建 | 第22页 |
| ·成熟 T 载体的克隆功能验证 | 第22-23页 |
| ·成熟 T 载体的对插入失活的灵敏程度验证 | 第23-24页 |
| 4 结果与分析 | 第24-36页 |
| ·绿色荧光蛋白突变体 EMERALD 基因和 PUC18 线性载体片段的扩增 | 第24-25页 |
| ·EMERALD 在大肠杆菌表达系统的胞外光谱性质和晶体生长 | 第25-29页 |
| ·原核表达载体 p28SUMO-emerald 的构建 | 第25-26页 |
| ·重组蛋白 SUMO-GFP 的表达与纯化 | 第26页 |
| ·绿色荧光蛋白 Emerald 的光谱扫描 | 第26-27页 |
| ·绿色荧光蛋白 Emerald 的晶体生长 | 第27-28页 |
| ·绿色荧光蛋白 Emerald 晶体结构预测 | 第28-29页 |
| ·EMERALD 在大肠杆菌系统中的胞内荧光性质 | 第29-31页 |
| ·pUC18E 载体的构建 | 第29页 |
| ·Emerald 在大肠杆菌 DH5α菌株中渗透表达的表达量分析和荧光强度分析 | 第29-31页 |
| ·利用 EMERALD 作为筛选试剂的 T 载体的构建 | 第31-32页 |
| ·克隆载体 pESN 和 pESM 的构建 | 第31-32页 |
| ·末端加 T 构建 pESN 和 pESM-T vector | 第32页 |
| ·成熟 T 载体的克隆功能验证 | 第32-33页 |
| ·成熟 T 载体的对插入失活的灵敏程度验证 | 第33-36页 |
| 5 讨论 | 第36-37页 |
| ·绿色荧光蛋白突变体 EMERALD 的大肠杆菌胞内外活性研究 | 第36页 |
| ·基于绿色荧光蛋白 EMERALD 插入失活的 T 载体的构建及功能验证 | 第36-37页 |
| 6 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 个人简介 | 第45页 |
