| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-20页 |
| ·乙偶姻的性质及应用 | 第9-10页 |
| ·乙偶姻的性质 | 第9页 |
| ·乙偶姻的应用 | 第9-10页 |
| ·乙偶姻的合成方法 | 第10-11页 |
| ·化学合成法 | 第10页 |
| ·生物转化法 | 第10-11页 |
| ·乙偶姻相关代谢过程 | 第11-14页 |
| ·乙偶姻和 2,3-丁二醇的合成与分解途径 | 第11-13页 |
| ·乙偶姻新陈代谢的生理意义 | 第13页 |
| ·溶氧条件对乙偶姻及代谢副产物的影响 | 第13-14页 |
| ·枯草芽孢杆菌中心碳代谢途径 | 第14页 |
| ·提高乙偶姻生物合成的代谢工程策略 | 第14-16页 |
| ·强化乙偶姻合成途径的关键酶 | 第15页 |
| ·阻断或弱化乙偶姻进一步代谢的途径 | 第15页 |
| ·菌种改良与微生物性能强化的综合应用 | 第15-16页 |
| ·国内外研究现状与进展 | 第16-18页 |
| ·乙偶姻的研究现状 | 第16-17页 |
| ·乙偶姻的研究趋势 | 第17-18页 |
| ·本课题研究内容与意义 | 第18-20页 |
| ·本课题研究内容 | 第18页 |
| ·本课题研究意义 | 第18-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-37页 |
| ·实验材料 | 第20-27页 |
| ·菌种和质粒 | 第20-22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22-23页 |
| ·实验药品 | 第23-25页 |
| ·主要溶液 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化[60] | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·DNA 片段的回收纯化 | 第29-30页 |
| ·PCR 反应体系 | 第30-31页 |
| ·酶切体系 | 第31页 |
| ·载体质粒的去磷酸化 | 第31-32页 |
| ·去磷酸化酶和内切酶的失活 | 第32页 |
| ·酶连体系 | 第32-33页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| ·枯草芽孢杆菌的 Spizzen 转化 | 第33页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因组 DNA 的提取 | 第33-34页 |
| ·摇瓶中菌体生长特性和发酵情况 | 第34-35页 |
| ·发酵罐发酵 | 第35页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第35-36页 |
| ·乙酰乳酸合成酶酶活测定 | 第36页 |
| ·引物设计和基因测序 | 第36-37页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第37-67页 |
| ·bdhA 和 acoA 基因敲除 | 第37-43页 |
| ·bdhA 和 acoA 敲除质粒的构建 | 第37-42页 |
| ·Spizizen 转化得双交换敲除菌株 | 第42-43页 |
| ·alsSD 操纵子的过表达 | 第43-47页 |
| ·以 pDK 为载体的整合型质粒的构建 | 第43-45页 |
| ·Spizizen 转化得双交换过表达菌株 | 第45-47页 |
| ·pta 和 ldh 基因敲除 | 第47-57页 |
| ·pta 敲除载体的构建 | 第47-51页 |
| ·Spizizen 转化得双交换敲除菌株 | 第51-52页 |
| ·融合方法构建 ldh 敲除质粒 | 第52-56页 |
| ·Spizizen 转化敲除 ldh 基因 | 第56-57页 |
| ·工程菌与野生菌的摇瓶发酵试验 | 第57-65页 |
| ·溶氧水平对乙偶姻和 2,3-丁二醇得率的影响 | 第57-58页 |
| ·bdhA 和 acoA 基因敲除菌生长和乙偶姻发酵表征 | 第58-60页 |
| ·alsSD 操纵子过表达对枯草芽孢杆菌生产乙偶姻的作用 | 第60-62页 |
| ·pta 敲除菌的生理和代谢情况 | 第62页 |
| ·高糖浓度时不同培养基和溶氧条件对乙偶姻生产的影响 | 第62-65页 |
| ·工程菌和野生菌的发酵罐发酵表征 | 第65-67页 |
| 第四章 结论与展望 | 第67-69页 |
| ·结论 | 第67-68页 |
| ·展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
