| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-17页 |
| ·B19 病毒简介 | 第11-13页 |
| ·B19病毒的生物学属性 | 第11页 |
| ·B19病毒的基因组 | 第11页 |
| ·B19病毒的分子生物学特征 | 第11-12页 |
| ·B19病毒VP1独特区 | 第12页 |
| ·B19病毒的流行病学特征 | 第12-13页 |
| ·磷脂酶A2(PLA2)简介 | 第13-14页 |
| ·磷脂酶A2来源以及分类 | 第13页 |
| ·磷脂酶A2的作用 | 第13页 |
| ·细小病毒磷脂酶A2的特点 | 第13-14页 |
| ·B19病毒的研究现状 | 第14-16页 |
| ·对B19病毒治病机理研究现状 | 第14页 |
| ·对B19病毒基因功能研究现状 | 第14-16页 |
| ·研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料 | 第17-22页 |
| ·菌株和质粒 | 第17-18页 |
| ·引物 | 第18-19页 |
| ·扩增细小病毒B19独特区引物 | 第18页 |
| ·氨基酸定点突变引物 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·普通液体LB培养基 | 第19页 |
| ·普通固体LB培养基 | 第19页 |
| ·含葡萄糖培养基 | 第19页 |
| ·常用溶液和试剂配制 | 第19-21页 |
| ·碱裂解法提取质粒DNA所用溶液 | 第19-20页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第20页 |
| ·SDS-PAGE电泳所用溶液 | 第20页 |
| ·Western-blot检测所用溶液 | 第20-21页 |
| ·蛋白质纯化试剂 | 第21页 |
| ·常用药品 | 第21页 |
| ·酶和其它常规试剂 | 第21-22页 |
| 第三章 实验方法 | 第22-28页 |
| ·重组质粒的构建 | 第22-23页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·碱裂解法提取大肠杆菌质粒(依照分子克隆操作步骤) | 第22页 |
| ·限制性内切酶处理载体及DNA片段 | 第22页 |
| ·载体和目的片段的链接 | 第22页 |
| ·重组质粒的转化 | 第22-23页 |
| ·重组克隆子的筛选和测序 | 第23页 |
| ·寡核苷酸介导的定点突变(PCR-SDM) | 第23-24页 |
| ·原理 | 第23-24页 |
| ·定点突变PCR程序 | 第24页 |
| ·定点突变PCR体系 | 第24页 |
| ·蛋白质诱导表达 | 第24页 |
| ·WESTERN-BLOT检测 | 第24-25页 |
| ·转膜 | 第24-25页 |
| ·免疫反应及显色 | 第25页 |
| ·蛋白质纯化 | 第25-26页 |
| ·目的蛋白大规模诱导 | 第25页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第25-26页 |
| ·磷脂酶A2活性检测 | 第26-28页 |
| ·原理 | 第26-27页 |
| ·实验前准备 | 第27页 |
| ·实验步骤 | 第27-28页 |
| 第四章 结果与分析 | 第28-40页 |
| ·VP1独特区磷脂酶A2活性的研究 | 第28-34页 |
| ·VP1独特区关键氨基酸的突变 | 第28-30页 |
| ·构建原核表达质粒 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pMal-muVP1诱导表达(小量表达检测) | 第31页 |
| ·重组质粒pMal-muVP1大规模诱导表达 | 第31-32页 |
| ·Western-blot检测目的蛋白 | 第32页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第32-33页 |
| ·酶活性检测 | 第33-34页 |
| ·突变感染性克隆的构建 | 第34-40页 |
| ·突变PCR模板PB2040的构建 | 第35-37页 |
| ·快速PCR法介导目的氨基酸的突变 | 第37-38页 |
| ·突变克隆PBmuVP1的筛选 | 第38-40页 |
| 第五章 小结与讨论 | 第40-42页 |
| ·关于本实验中所用方法的讨论 | 第40-41页 |
| ·根据实验对B19病毒VP1独特区域功能的分析 | 第41-42页 |
| 展望 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 本文缩写词 | 第46-47页 |
| 在读期间发表论文 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48页 |