| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-18页 |
| ·PrP 的性质与结构 | 第11-12页 |
| ·朊蛋白病 | 第12-13页 |
| ·朊蛋白病的发现 | 第12页 |
| ·病理特征 | 第12-13页 |
| ·致病机制 | 第13页 |
| ·PrP 的检测方法 | 第13-16页 |
| ·生物学检测（Bioassay） | 第13-14页 |
| ·免疫学检测 | 第14-15页 |
| ·蛋白错误折叠循环扩增法 | 第15页 |
| ·毛细管电泳法 | 第15-16页 |
| ·与 PrP 相关的蛋白质的研究—噬菌体 G 蛋白（ FGP） | 第16页 |
| ·噬菌体 G 蛋白（FGP）的性质 | 第16页 |
| ·FGP 与 PrP 相互作用 | 第16页 |
| ·基因工程方法获得 PrP | 第16-17页 |
| ·研究目的 | 第17-18页 |
| 第2章 牛朊蛋白局部片段的克隆 | 第18-39页 |
| ·材料 | 第18-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第18-19页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第19页 |
| ·相关试剂配置 | 第19-20页 |
| ·实验仪器及设备 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-34页 |
| ·引物设计 | 第20-22页 |
| ·PrP 片段的基因克隆 | 第22-30页 |
| ·重组质粒的制备与构建 | 第30-33页 |
| ·转化 | 第33-34页 |
| ·重组质粒鉴定及序列分析 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-37页 |
| ·重叠延伸 PCR 扩增 | 第34-36页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·扩增产物序列分析 | 第37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第3章 目的基因的诱导表达、纯化，包涵体蛋白的复性及蛋白酶 K 抗性研究 | 第39-55页 |
| ·材料 | 第39-41页 |
| ·质粒和菌株 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·相关试剂配制 | 第39-41页 |
| ·实验仪器及设备 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-46页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的 SDS-PAGE 分析 | 第42-44页 |
| ·表达条件优化 | 第44页 |
| ·目的蛋白的表达形式 | 第44页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第44-46页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第46页 |
| ·重组 PrP 蛋白酶 K（PK）抗性研究 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-52页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·表达条件优化 | 第47-49页 |
| ·目的蛋白的表达形式 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| ·重组蛋白的复性 | 第51页 |
| ·重组 PrP 蛋白酶 K（PK）抗性研究 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-55页 |
| 第4章 重组 PrP 多克隆抗体的制备及鉴定 | 第55-63页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·实验动物 | 第55页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·主要试剂配制 | 第55-56页 |
| ·主要仪器和设备 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| ·多抗制备 | 第56-57页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白 | 第57-59页 |
| ·兔多克隆抗体纯化 | 第59-60页 |
| ·结果 | 第60-61页 |
| ·Western blot 鉴定重组蛋白 | 第60-61页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第61页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| 第5章 FGP 蛋白与重组 Pr P 结合能力分析及重组 PrP 检测方法探究 | 第63-73页 |
| ·材料 | 第63-64页 |
| ·试验用蛋白 | 第63页 |
| ·试剂 | 第63页 |
| ·相关试剂及配制 | 第63-64页 |
| ·主要实验仪器 | 第64页 |
| ·方法 | 第64-66页 |
| ·重组 PrP 与 FGP 蛋白结合力分析 | 第64-66页 |
| ·Western blot 检测重组 PrP 组织模拟样品 | 第66页 |
| ·结果 | 第66-71页 |
| ·重组 PrP 与 FGP 蛋白结合 | 第66-70页 |
| ·Western blot 测定PrP检出限 | 第70-71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 第6章 结论和建议 | 第73-75页 |
| ·主要结论 | 第73-74页 |
| ·建议 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附录 | 第84-86页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第86页 |
