| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 一 前言 | 第11-25页 |
| 1 免疫系统简介 | 第11-14页 |
| ·固有免疫 | 第11-14页 |
| ·固有免疫应答 | 第12页 |
| ·固有免疫应答在抗病毒中的作用 | 第12-13页 |
| ·Ⅰ型干扰素在抗病毒中的作用 | 第13-14页 |
| ·模式识别受体-TOLL样受体介导的抗病毒信号转导 | 第14页 |
| 2 RIG-Ⅰ的研究进展 | 第14-17页 |
| ·RIG-Ⅰ的发现 | 第14-16页 |
| ·RIG-Ⅰ在抗病毒固有免疫反应中的作用 | 第16-17页 |
| 3 原核表达体系的研究和应用 | 第17-19页 |
| ·概述 | 第17-18页 |
| ·pET表达系统 | 第18-19页 |
| 4 蛋白纯化 | 第19-21页 |
| ·亲和柱纯化 | 第19-20页 |
| ·FPLC纯化 | 第20-21页 |
| 5 RIG-Ⅰ和RNA的相互作用 | 第21-22页 |
| 6 蛋白结晶 | 第22-23页 |
| 7 RIG-Ⅰ的研究意义、内容、路线 | 第23-25页 |
| ·本研究的技术路线 | 第24-25页 |
| ·具体的研究内容 | 第25页 |
| 二 材料与方法 | 第25-41页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| ·试剂 | 第25-26页 |
| ·菌种与质粒 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-41页 |
| ·基因克隆、亚克隆 | 第26-30页 |
| ·RIG-Ⅰ的引物设计 | 第26页 |
| ·PCR扩增反应及PCR产物酶切回收 | 第26-28页 |
| ·pET系列表达载体的酶切及大片段回收 | 第28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·重组子的鉴定 | 第29-30页 |
| ·基因表达和蛋白纯化 | 第30-35页 |
| ·基因表达检测 | 第30-31页 |
| ·可溶性测试 | 第31页 |
| ·蛋白质行为的测定及蛋白纯化 | 第31-34页 |
| ·聚丙烯酰胺胶的配置及SDS-PAGE电泳 | 第34页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第34-35页 |
| ·体外蛋白质功能的测定 | 第35-41页 |
| ·RNA的体外转录及回收 | 第35-37页 |
| ·RNA和蛋白质的相互作用 | 第37-40页 |
| ·RNA和蛋白质复合物的纯化 | 第40-41页 |
| ·蛋白结晶 | 第41页 |
| 三 结果与分析 | 第41-53页 |
| 1 重组子的酶切鉴定 | 第41页 |
| 2 重组子的测序鉴定 | 第41-45页 |
| 3 重组子的表达鉴定 | 第45页 |
| 4 蛋白质可溶性及其行为的分析 | 第45页 |
| 5 目的蛋白的大量纯化 | 第45-49页 |
| 6 RNA的体外转录 | 第49页 |
| 7 RIG-ⅠN末端CARD结构域和C末端解旋酶结构域的相互作用 | 第49页 |
| 8 RIG-Ⅰ蛋白和RNA相互作用分析 | 第49-50页 |
| 9 蛋白晶体分析 | 第50-53页 |
| 四 结论 | 第53页 |
| 五 讨论 | 第53-60页 |
| 1 克隆构建和外源基因表达的影响因素 | 第53-54页 |
| ·克隆构建的影响因素 | 第53页 |
| ·外源基因表达的影响因素 | 第53-54页 |
| 2 蛋白质纯化影响因素 | 第54-57页 |
| 3 不溶性蛋白的处理 | 第57-58页 |
| 4 RNA体外转录及RNA和蛋白相互作用的影响因素 | 第58-59页 |
| 5 影响蛋白质结晶的因素 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 附录 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
