| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 文献综述（Summary of Literature） | 第8-26页 |
| 1． 草菇简介 | 第8-11页 |
| 1．1 草菇的营养价值 | 第8-9页 |
| 1．2 草菇的栽培 | 第9页 |
| 1．3 制约草菇生产发展的因素 | 第9-10页 |
| 1．4 草菇遗传育种研究 | 第10-11页 |
| 2． 低温应答 | 第11-20页 |
| 2．1 植物冷害及低温应答研究进展 | 第11-16页 |
| 2．1．1 冷害的形态表现 | 第11-12页 |
| 2．1．2 膜脂与植物抗冷性的关系 | 第12-13页 |
| 2．1．3 细胞抗氧化能力与植物抗冷性的关系 | 第13-14页 |
| 2．1．4 低温诱导蛋白与植物抗冷性的关系 | 第14-16页 |
| 2．2 植物抗寒相关基因的研究进展 | 第16-17页 |
| 2．3 细菌及其它微生物低温应答研究进展 | 第17-20页 |
| 2．3．1 大肠杆菌低温应答的研究 | 第17-19页 |
| 2．3．2 在其它微生物中发现地低温应答 | 第19页 |
| 2．3．3 草菇低温自溶的研究 | 第19-20页 |
| 3． 克隆新基因的常用方法 | 第20-26页 |
| 3．1 序列克隆法 | 第20页 |
| 3．2 功能克隆法 | 第20-21页 |
| 3．3 转座子或T-DNA标签法（transposon or T-DNA tagging） | 第21-22页 |
| 3．4 图谱分离法 | 第22页 |
| 3．5 mRNA差别显示法 | 第22-23页 |
| 3．6 cDNA文库的建立与全长cDNA的克隆 | 第23-26页 |
| 3．6．1 全长cDNA文库的建立 | 第23-24页 |
| 3．6．2 cDNA全长的克隆 | 第24-26页 |
| 材料和试剂（Materials and Reagents） | 第26-33页 |
| 1． 试验材料 | 第26页 |
| 2． 供试培养基 | 第26-27页 |
| 3． 菌种培养及保存 | 第27页 |
| 4． 试验试剂 | 第27-32页 |
| 4．1 草菇DNA提取试剂 | 第27-28页 |
| 4．2 RNA分离纯化试剂 | 第28页 |
| 4．3 CDNA合成有关试剂 | 第28-29页 |
| 4．4 核酸电泳试剂 | 第29页 |
| 4．5 PCR合成地高辛标记DNA探针的相关试剂 | 第29-30页 |
| 4．6 PCR产物纯化试剂 | 第30页 |
| 4．7 Southern杂交的相关试剂 | 第30-31页 |
| 4．8 地高辛杂交检测相关试剂 | 第31-32页 |
| 4．9 构建CDNA文库相关试剂 | 第32页 |
| 5． 常用仪器 | 第32-33页 |
| 实验方法（Methods） | 第33-47页 |
| 1． 草菇菌丝低温致死时间的测定 | 第33页 |
| 2． 模拟杂交—选择地高辛杂交探针的最适浓度 | 第33页 |
| 3． DIG-System检测的灵敏度测试 | 第33-35页 |
| 4． mRNA差异显示技术分离的草菇低温应答基因片段特异性的验证 | 第35-37页 |
| 4．1 采用总RNA提取试剂盒制备正常草菇和低温处理草菇的RNA | 第35页 |
| 4．2 反转录合成cDNA | 第35页 |
| 4．3 mRNA差异显示技术 | 第35-36页 |
| 4．4 反转录合成地高辛标记的cDNA探针 | 第36页 |
| 4．5 cDNA探针的纯化 | 第36页 |
| 4．6 琼脂糖凝胶电泳 | 第36-37页 |
| 4．7 将低温应答基因片段真空转移、固定在尼龙膜上 | 第37页 |
| 4．8 预杂交 | 第37页 |
| 4．9 杂交 | 第37页 |
| 5． 采用PCR技术对低温诱导的特异性片段进行非放射性dig-dUTP标记 | 第37-39页 |
| 5．1 特异性片段及其对应引物 | 第37-38页 |
| 5．2 制备PCR Dig Prob Synthesis Mix | 第38-39页 |
| 5．3 PCR扩增 | 第39页 |
| 5．4 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第39页 |
| 6． PCR产物的纯化 | 第39页 |
| 7． Southern印迹 | 第39-42页 |
| 7．1 基因组DNA的提取 | 第40页 |
| 7．2 基因组DNA部分酶切 | 第40-41页 |
| 7．3 Southern转移 | 第41页 |
| 7．4 预杂交 | 第41-42页 |
| 7．5 杂交 | 第42页 |
| 7．6 洗膜、显色的操作方法 | 第42页 |
| 8 草菇低温诱导基因cDNA文库的构建 | 第42-47页 |
| 8．1 总RNA的分离提取 | 第42页 |
| 8．2 甲醛变性凝胶电泳检测RNA完整性 | 第42页 |
| 8．3 总RNA中Poly（A~+）RNA的快速分离纯化 | 第42-43页 |
| 8．4 cDNA文车的构建 | 第43-47页 |
| 8．4．1 cDNA第一链的合成 | 第43-44页 |
| 8．4．2 cDNA第二链的合成 | 第44-45页 |
| 8．4．3 cDNA片段两端的修饰 | 第45-46页 |
| 8．4．4 将cDNA克隆λ载体 | 第46页 |
| 8．4．5 cDNA文库的扩增 | 第46-47页 |
| 结果与分析 | 第47-57页 |
| 1． 草菇低温致死时间的测定结果 | 第47页 |
| 2． 地高辛探针的最适浓度的选择 | 第47-48页 |
| 3． DIG-System检测灵敏度测试结果 | 第48-49页 |
| 4． 采用总RNA提取试剂盒制备RNA | 第49页 |
| 5． 采用mRNA差异显示技术分离的草菇低温应答基因片段的部分琼脂糖凝胶电泳图谱 | 第49-52页 |
| 6． cDNA-DNA杂交对筛选DNA片段的低温特异性验证结果 | 第52-53页 |
| 7． 用PCR技术对草菇低温诱导的特异性片段进行非放射性dig-dUTP标记 | 第53页 |
| 8． 草菇基因组DNA的提取结果 | 第53-54页 |
| 8．1 基因组DNA电泳图谱 | 第53-54页 |
| 8．2 DNA的定量及纯度分析 | 第54页 |
| 9． 草菇基因组DNA的酶切结果 | 第54-55页 |
| 10． Southem印迹 | 第55-57页 |
| 讨论 | 第57-62页 |
| 1． Southern印迹的分析 | 第57页 |
| 2． 关于构建cDNA文库的总RNA的提取及cDNA的合成与纯化 | 第57-59页 |
| 3． 研究低温冷害的分子机理的意义 | 第59页 |
| 4． 抑制草菇低温自溶的可能途径 | 第59-62页 |
| 4．1 抗冻蛋白的遗传转化 | 第59-60页 |
| 4．2 调控基因的遗传转化 | 第60页 |
| 4．3 提高膜脂的不饱和度基因的遗传转化 | 第60-62页 |
| 结论（Cunclusions） | 第62-63页 |
| 英文摘要 | 第63-64页 |
| 参考文献（Literatures） | 第64-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
