| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 文献与综述 | 第10-22页 |
| ·Survivin对细胞周期调控研究进展 | 第10-18页 |
| ·Survivin结构 | 第10-11页 |
| ·Survivin的生物学特性 | 第11-13页 |
| ·Survivin的抗凋亡作用 | 第11-13页 |
| ·Survivin在细胞分裂中的作用 | 第13页 |
| ·Survivin在胞内亚细胞微环境中的定位 | 第13-14页 |
| ·Survivin对细胞周期调控机制 | 第14-16页 |
| ·Survivin的表达调控 | 第14-15页 |
| ·Survivin在有丝分裂和细胞凋亡中的调控 | 第15页 |
| ·Survivin的磷酸化调控 | 第15-16页 |
| ·Survivin对肿瘤细胞周期的作用与机制 | 第16-17页 |
| ·Survivin是一个有丝分裂调控子 | 第16页 |
| ·Survivin在微管中功能 | 第16-17页 |
| ·Survivin在染色体乘客蛋白中的角色 | 第17页 |
| ·Survivin与Aurora B激酶关系 | 第17页 |
| ·Survivin与肿瘤细胞凋亡 | 第17-18页 |
| ·Survivin在癌症中的作用 | 第17-18页 |
| ·Survivin与癌症预后 | 第18页 |
| ·以Survivin为靶标的药物研究策略与前景 | 第18-21页 |
| ·负显性突变体 | 第18-20页 |
| ·反义寡核酸序列、核酶、siRNA | 第20页 |
| ·小分子抑制子 | 第20页 |
| ·接种疫苗策略 | 第20-21页 |
| ·本课题的课题设计及研究意义 | 第21-22页 |
| 第二章 Survivin突变体的制备 | 第22-41页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂及培养基 | 第22-24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-32页 |
| ·引物的设计与合成 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第26页 |
| ·质粒的提取和转化 | 第26页 |
| ·Survivin基因的PCR定点突变与序列测定 | 第26-29页 |
| ·质粒的定点突变 | 第26-29页 |
| ·重组蛋白的核苷酸序列分析 | 第29页 |
| ·Survivin突变体蛋白诱导与表达 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)的转化及种子培养 | 第29页 |
| ·Survivin突变体蛋白摇瓶诱导表达 | 第29页 |
| ·Survivin突变体蛋白表达含量的测定 | 第29-30页 |
| ·Survivin突变体的纯化和复性 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌裂解及包涵体的洗涤 | 第30-31页 |
| ·蛋白包涵体离子柱交换、柱上复性和透析 | 第31页 |
| ·Survivin突变体复性后SDS-PAGE和毛细管电泳检测 | 第31-32页 |
| ·Survivin突变体蛋白复性后Western blot检测 | 第32页 |
| ·实验结果 | 第32-39页 |
| ·Survivin基因的PCR定点突变结果 | 第32-33页 |
| ·表达质粒的构建与鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·重组表达载体的核苷酸测序结果分析 | 第34-35页 |
| ·Survivin突变体表达产物的SDS-PAGE分析 | 第35页 |
| ·Survivin突变体蛋白诱导表达条件 | 第35-36页 |
| ·Survivin突变体表达产物的纯化和复性结果 | 第36-37页 |
| ·Survivin突变体蛋白复性后SDS-PAGE和毛细管电泳检测结果 | 第37-39页 |
| ·Survivin突变体蛋白Western blot检测结果 | 第39页 |
| ·讨论 | 第39-40页 |
| ·Survivin负显性突变体与定点突变技术 | 第40页 |
| ·以Survivin为肿瘤治疗靶点药物的设计与重组蛋白药物设计的意义 | 第40页 |
| ·小结 | 第40-41页 |
| 第三章 重组蛋白对癌细胞周期的影响 | 第41-51页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·主要试剂及其配置 | 第41-42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-45页 |
| ·细胞培养方法 | 第42-43页 |
| ·MTT法检测突变体蛋白抑制细胞增殖情况 | 第43-44页 |
| ·流式细胞技术检测TmSm三种突变体蛋白对对细胞周期影响 | 第44页 |
| ·Western blot检测TmSm突变体蛋白对Aurora B激酶的活性的影响 | 第44-45页 |
| ·实验结果 | 第45-49页 |
| ·TmSm突变体蛋白对癌细胞增殖的抑制作用 | 第45-46页 |
| ·TmSm突变体蛋白对癌细胞周期的改变 | 第46-48页 |
| ·TmSm突变体蛋白对Aurora B激酶的激活情况 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| 第四章 重组蛋白促癌细胞凋亡研究 | 第51-57页 |
| ·引言 | 第51页 |
| ·实验材料 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-52页 |
| ·细胞培养方法 | 第51页 |
| ·流式细胞技术检测TmSm三种突变体蛋白体对乳腺癌线粒体膜电位影响 | 第51-52页 |
| ·流式细胞技术检测突变体蛋白对乳腺癌细胞凋亡影响 | 第52页 |
| ·Western blot检测三种突变体蛋白对Caspase-3影响 | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-56页 |
| ·TmSm突变体蛋白对细胞线粒体膜电位改变情况 | 第52-54页 |
| ·TmSm突变体蛋白促乳腺癌细胞凋亡作用 | 第54-56页 |
| ·TmSm突变体蛋白对caspase-3激活情况 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第五章 结论和展望 | 第57-59页 |
| ·结论 | 第57页 |
| ·展望 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
