| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-47页 |
| ·螺原体的分类现状及生物学特性的研究进展 | 第15-24页 |
| ·螺原体的分类现状 | 第15-23页 |
| ·螺原体的生物学特性研究进展 | 第23-24页 |
| ·柔膜体纲细菌基因组及致病相关基因的研究进展 | 第24-31页 |
| ·柔膜体纲基因组研究进展 | 第24-25页 |
| ·柔膜体纲微生物致病性研究概况 | 第25-31页 |
| ·河蟹颤抖病的研究及中华绒螯蟹螺原体的科学命名 | 第31-35页 |
| ·水生甲壳动物细胞培养研究进展 | 第35-36页 |
| ·甲壳动物先天免疫系统研究进展 | 第36-42页 |
| ·水生螺原体的诊断和防治技术集成 | 第42-45页 |
| ·水生螺原体的诊断技术 | 第43-44页 |
| ·水生螺原体的防治技术集成 | 第44-45页 |
| ·本论文的研究目的、内容、意义和技术路线 | 第45-47页 |
| 第2章 中华绒螯蟹血细胞原代培养体系的建立和优化 | 第47-53页 |
| ·材料和方法 | 第47-49页 |
| ·实验动物 | 第47页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-49页 |
| ·实验结果 | 第49-51页 |
| ·抗凝剂的选择 | 第49页 |
| ·河蟹血细胞合适的细胞培养温度 | 第49-50页 |
| ·细胞培养过程中的细胞生长状态 | 第50-51页 |
| ·中华绒螯蟹血细胞存活能力的鉴定 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 第3章 中华绒螯蟹螺原体诱导刺激下中华绒螯蟹血细胞数量的变化及原代培养血细胞的免疫反应 | 第53-64页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·主要设备 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·引物设计与合成 | 第53页 |
| ·实验动物和中华绒螯蟹螺原体的培养 | 第53-54页 |
| ·实验动物 | 第53-54页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体的培养 | 第54页 |
| ·中华绒螯蟹血细胞的培养 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-58页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体诱导刺激下中华绒螫蟹的血细胞数量变化趋势 | 第54-55页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体诱导刺激下中华绒螯蟹原代培养血细胞的形态变化和免疫反应 | 第55-58页 |
| ·实验结果 | 第58-62页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体诱导刺激后血细胞数量的变化 | 第58-59页 |
| ·螺原体刺激中华绒螯蟹原代培养血细胞后细胞形态的变化规律 | 第59页 |
| ·螺原体刺激中华绒螯蟹原代培养血细胞后总RNA的提取 | 第59-60页 |
| ·Real-Time RT-PCR结果 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第4章 基于选择性捕获转录序列技术的中华绒螯蟹螺原体重要功能基因的筛选研究 | 第64-85页 |
| ·实验材料 | 第64-65页 |
| ·主要实验仪器和试剂 | 第64-65页 |
| ·实验动物、中华绒螯蟹螺原体的培养和血细胞的原代培养 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-73页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体rDNA的克隆 | 第65-68页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体基因组的光敏生物素化 | 第68页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体回感后宿主总RNA的提取和捕获样品的制备 | 第68-71页 |
| ·选择性捕获转录序列实验(SCOTS) | 第71-72页 |
| ·SCOTS捕获序列的基因组定位和序列分析 | 第72-73页 |
| ·实验结果和讨论 | 第73-85页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体rDNA的克隆 | 第73-74页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体全基因组的提取和浓度测定 | 第74页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体基因组的光敏生物素化结果 | 第74页 |
| ·S.eriocheiris回感中华绒螫蟹后血细胞的电镜观察 | 第74-76页 |
| ·S.eriocheiris回感中华绒螯蟹和原代培养血细胞后总RNA的提取与含量测定 | 第76页 |
| ·选择性捕获转录序列结果 | 第76-78页 |
| ·SCOTS技术在本实验中的应用 | 第78-79页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体与肺炎支原体致病性的比较分析 | 第79-81页 |
| ·SCOTS捕获部分重要功能蛋白的分析 | 第81-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 第5章 中华绒螯蟹螺原体类螺旋蛋白(SLP31)的序列分析、克隆和原核表达 | 第85-102页 |
| ·材料 | 第86-89页 |
| ·主要设备 | 第86页 |
| ·主要试剂 | 第86-88页 |
| ·引物设计与合成 | 第88-89页 |
| ·方法 | 第89-94页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体和S.mirum的基因组DNA提取 | 第89页 |
| ·SLP31基因PCR扩增 | 第89-90页 |
| ·SLP31基因与pUC19载体的连接 | 第90页 |
| ·pUC-SLP31连接产物的转化 | 第90页 |
| ·菌液PCR鉴定阳性克隆、测序分析 | 第90页 |
| ·点突变实验 | 第90-91页 |
| ·表达载体的构建 | 第91-92页 |
| ·重组蛋白的表达与鉴定 | 第92-93页 |
| ·Western blot分析蛋白表达结果 | 第93页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第93-94页 |
| ·数据分析处理 | 第94页 |
| ·结果 | 第94-100页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体基因组DNA的提取、SLP31基因PCR扩增及序列分析 | 第94-96页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体SLP31基因的点突变 | 第96-97页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第97-98页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第98-100页 |
| ·讨论 | 第100-102页 |
| 第6章 利用多重PCR技术同时检测水生甲壳动物螺原体和白斑综合症病毒检测方法的建立 | 第102-111页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第103页 |
| ·实验动物 | 第103页 |
| ·中华绒螯蟹螺原体和白斑综合症病毒的准备 | 第103-104页 |
| ·引物设计与合成 | 第104页 |
| ·实验方法 | 第104-106页 |
| ·基于两种病原的克氏原螯虾回感实验 | 第104页 |
| ·总DNA的提取 | 第104-105页 |
| ·引物混合的比例 | 第105页 |
| ·多重PCR检测 | 第105页 |
| ·利用积分光密度integral ptiealdensity(IoD)分析评价克氏原鳌虾的病 原相对感染程度 | 第105-106页 |
| ·实验结果 | 第106-109页 |
| ·最佳引物混合比例 | 第106页 |
| ·多重PCR扩增结果 | 第106-108页 |
| ·相对感染程度的分析 | 第108-109页 |
| ·讨论 | 第109-111页 |
| 第7章 结论 | 第111-114页 |
| 附录A | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-129页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第129-132页 |
| 致谢 | 第132-133页 |
