| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| ·紫杉醇生物合成研究现状 | 第11-15页 |
| ·微小RNA 基因的研究概况 | 第15-18页 |
| ·微小RNA 技术的研究进展 | 第15-16页 |
| ·微小RNA 特征及其功能 | 第16-17页 |
| ·用微小RNA 技术研究紫杉烷13α-羟基化酶基因的意义 | 第17-18页 |
| ·研究目标和主要研究内容 | 第18-22页 |
| ·研究目标 | 第18-19页 |
| ·主要研究内容 | 第19-20页 |
| ·紫杉烷13α-羟基化酶基因的克隆 | 第19页 |
| ·正向表达载体的构建 | 第19页 |
| ·微小RNA 载体的构建 | 第19页 |
| ·小RNA 载体对烟草的转化研究 | 第19-20页 |
| ·小RNA 载体对红豆杉的转化研究 | 第20页 |
| ·转基因材料分析 | 第20页 |
| ·小RNA 功能的确定 | 第20页 |
| ·研究技术路线 | 第20-22页 |
| 第二章 13α-羟基化酶植物表达载体的构建 | 第22-34页 |
| ·紫杉烷13α-羟基化酶基因的克隆 | 第22-30页 |
| ·试验材料与试剂 | 第22页 |
| ·试验方法 | 第22-26页 |
| ·红豆杉基因组DNA 的提取 | 第22-23页 |
| ·红豆杉叶片RNA 的提取及反转录 | 第23-24页 |
| ·目的基因13OH 引物的设计 | 第24页 |
| ·红豆杉13OH 基因的克隆与测序 | 第24-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-30页 |
| ·红豆杉基因组DNA 及RNA 的检测 | 第26-27页 |
| ·紫杉烷13OH 基因的克隆和鉴定结果 | 第27-30页 |
| ·紫杉烷13α-羟基化酶植物表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·试验材料与试剂 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-32页 |
| ·紫杉烷13α-羟基化酶植物表达载体的电转化 | 第32-34页 |
| ·农杆菌GV3101 电转化感受态的制备 | 第32-33页 |
| ·试剂配制 | 第32页 |
| ·农杆菌感受态细胞的培养 | 第32页 |
| ·制备感受态农杆菌 | 第32-33页 |
| ·紫杉烷13α-羟化酶载体电击转化农杆菌GV3101 | 第33-34页 |
| 第三章 小RNA 载体的构建 | 第34-45页 |
| ·构建在 pCAMBIA1305.1 中的五种小 RNA 载体 | 第34-40页 |
| ·试验材料与试剂 | 第34页 |
| ·试验方法 | 第34-38页 |
| ·五种小RNA 前体的克隆 | 第34-36页 |
| ·小RNA 表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-40页 |
| ·五种小RNA 前体的克隆鉴定 | 第38页 |
| ·克隆所得片段的PCR 及测序检测 | 第38-39页 |
| ·构建微小RNA 载体的检测 | 第39-40页 |
| ·构建在荧光载体 pEGAD 上的两种小 RNA 载体 | 第40-44页 |
| ·试验材料与试剂 | 第40-41页 |
| ·试验方法 | 第41-43页 |
| ·165a、169d 的引物设计及克隆 | 第41-42页 |
| ·小RNA 表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-44页 |
| ·165a，169d 的克隆 | 第43-44页 |
| ·构建到荧光载体上的检测 | 第44页 |
| ·微小RNA 载体的电转化 | 第44-45页 |
| 第四章 红豆杉及烟草的遗传转化研究 | 第45-59页 |
| ·烟草的遗传转化研究 | 第46-51页 |
| ·13OH 转基因烟草植株的获得 | 第46-49页 |
| ·试验材料与试剂 | 第46-47页 |
| ·试验方法 | 第47页 |
| ·PCR 及GUS 染色结果 | 第47-49页 |
| ·小调节子载体转化13OH 阳性转基因烟草植株 | 第49-51页 |
| ·试验材料与试剂 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50页 |
| ·瞬时表达结果 | 第50-51页 |
| ·红豆杉遗传转化的研究 | 第51-59页 |
| ·试验材料与试剂 | 第52页 |
| ·试验方法 | 第52-56页 |
| ·农杆菌真空渗透法转化红豆杉幼苗 | 第52-53页 |
| ·红豆杉叶片RNA 的提取 | 第53-55页 |
| ·Real-time PCR 检测 | 第55-56页 |
| ·结果分析 | 第56-59页 |
| 第五章 结论与讨论 | 第59-63页 |
| ·结论 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-75页 |
| 在读期间的学术研究 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
