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大豆ERF转录因子GmERF6和GmERF7的克隆与功能鉴定

中文摘要第1-7页
Abstract第7-11页
中英文缩略语表第11-18页
第1章 文献综述第18-34页
   ·植物抗逆相关转录因子的研究进展第18-24页
     ·AP2/ERF 类转录因子第19-20页
     ·bZIP 类转录因子第20-22页
     ·MYB 类转录因子第22-23页
     ·WRKY 类转录因子第23页
     ·NAC 类转录因子第23-24页
   ·ERF 转录因子的研究进展第24-31页
     ·ERF 转录因子的结构特征和分类第24-26页
     ·ERF 转录因子的功能特性第26-27页
     ·ERF 转录因子在植物逆境胁迫信号转导途径中的作用第27-29页
     ·ERF 转录因子在植物抗逆性改良上的应用第29-30页
     ·大豆中的 ERF 转录因子第30-31页
   ·植物转录因子的研究方法第31-33页
     ·植物转录因子的瞬间转化表达分析第31-32页
     ·植物转录因子的功能突变分析第32-33页
   ·本研究的目的与意义第33-34页
第2章 GmERF6 和 GmERF7 的克隆及序列分析第34-46页
   ·材料第34-35页
     ·植物材料第34页
     ·宿主菌及载体第34页
     ·酶及试剂第34页
     ·引物及测序第34-35页
     ·主要仪器设备第35页
   ·方法第35-38页
     ·RNA 提取及 cDNA 合成第35-36页
     ·GmERF6 和 GmERF7 的 PCR 扩增第36页
     ·PCR 产物的回收第36-37页
     ·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备第37页
     ·PCR 产物的克隆第37-38页
     ·冻融法转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞第38页
     ·GmERF6 和 GmERF7 序列的生物信息学分析第38页
   ·结果第38-44页
     ·GmERF6 和 GmERF7 基因 cDNA 全长序列的获得第38-39页
     ·GmERF6 和 GmERF7 基因的序列特征分析及编码蛋白的结构功能预测第39-42页
     ·GmERF6 和 GmERF7 基因保守域同源性及进化树分析第42-44页
   ·讨论第44页
   ·小结第44-46页
第3章 GmERF6 和 GmERF7 功能的初步分析第46-74页
   ·材料第46-48页
     ·植物材料第46页
     ·宿主菌及载体第46页
     ·酶及试剂第46页
     ·引物及测序第46-48页
     ·主要仪器设备第48页
   ·方法第48-57页
     ·亚细胞定位载体、酵母单杂交载体和原核表达载体的构建第48-49页
     ·亚细胞定位第49-50页
     ·酵母单杂交第50-51页
     ·蛋白纯化及 EMSA第51-53页
     ·GmERF6 和 GmERF7 转录调节活性分析第53-56页
     ·GmERF6 和 GmERF7 的表达模式分析第56-57页
   ·结果第57-71页
     ·GmERF6 和 GmERF7 的亚细胞定位第57-58页
     ·GmERF6 和 GmERF7 在酵母中的转录激活活性验证第58-60页
     ·GmERF6 和 GmERF7 蛋白与 GCC-box 的体外结合第60-64页
     ·GmERF6 和 GmERF7 转录调节活性分析第64-67页
     ·GmERF6 和 GmERF7 的表达模式分析第67-71页
   ·讨论第71-73页
   ·小结第73-74页
第4章 GmERF6 和 GmERF7 启动子的克隆及瞬时表达分析第74-88页
   ·材料第74-75页
     ·植物材料第74页
     ·宿主菌及载体第74页
     ·酶及试剂第74页
     ·引物及测序第74-75页
     ·主要仪器设备第75页
   ·方法第75-76页
     ·大豆基因组 DNA 的提取第75页
     ·GmERF6 和 GmERF7 基因启动子的克隆第75页
     ·GmERF6P 和 GmERF7P 顺式作用元件预测与分析第75页
     ·表达载体的构建及农杆菌转化第75-76页
     ·烟草叶片的转化及胁迫处理第76页
     ·组织化学染色第76页
     ·GUS 荧光定量第76页
   ·结果第76-85页
     ·GmERF6 和 GmERF7 基因启动子序列的获得第76-77页
     ·GmERF6P 和 GmERF7P 序列顺式作用元件的预测与分析第77-81页
     ·瞬时表达载体的构建及农杆菌转化第81页
     ·GmERF6P 和 GmERF7P 逆境诱导瞬时表达第81-84页
     ·GmERF6 对 GmERF6P 启动活性的反馈调控第84-85页
   ·讨论第85-87页
   ·小结第87-88页
第5章 GmERF6 在拟南芥中的表达及抗旱性分析第88-100页
   ·材料第88-90页
     ·植物材料第88页
     ·宿主菌及载体第88页
     ·酶及试剂第88页
     ·引物及测序第88-89页
     ·主要仪器设备第89-90页
   ·方法第90-92页
     ·拟南芥遗传转化第90页
     ·转基因拟南芥的筛选及鉴定第90-91页
     ·T3代转基因拟南芥抗逆相关基因的半定量 RT-PCR第91页
     ·拟南芥中抗逆相关基因启动子顺式作用元件预测分析第91-92页
     ·T3 代 GmERF6 转基因拟南芥的抗旱性鉴定第92页
   ·结果第92-98页
     ·GmERF6 转基因拟南芥植株的筛选及检测第92-94页
     ·T3代 GmERF6 转基因拟南芥中抗逆相关基因的表达第94-96页
     ·T3代 GmERF6 转基因拟南芥的抗旱性分析第96-98页
   ·讨论第98-99页
   ·小结第99-100页
第6章 GmERF7 在拟南芥和烟草中的表达及抗盐性分析第100-118页
   ·材料第100-101页
     ·植物材料第100页
     ·宿主菌及载体第100页
     ·酶及试剂第100页
     ·引物及测序第100-101页
     ·主要仪器设备第101页
   ·方法第101-104页
     ·拟南芥遗传转化第101页
     ·转基因拟南芥的筛选及鉴定第101页
     ·GmERF7 下游基因半定量 RT-PCR第101页
     ·拟南芥中抗逆相关基因启动子顺式作用元件预测分析第101页
     ·T_3代 GmERF7 转基因拟南芥高盐胁迫条件下萌发率测定第101页
     ·烟草遗传转化第101-102页
     ·转基因烟草的筛选及鉴定第102页
     ·T_1代 GmERF7 转基因烟草的抗盐性鉴定第102-104页
   ·结果第104-115页
     ·GmERF7 转基因拟南芥植株的筛选及检测第104-106页
     ·T_3代 GmERF7 转基因拟南芥中抗逆相关基因的表达第106-107页
     ·T_3代 GmERF7 转基因拟南芥高盐胁迫条件下萌发率分析第107-108页
     ·GmERF7 转基因烟草植株的筛选及检测第108-110页
     ·T_1代 GmERF7 转基因烟草的抗盐性分析第110-115页
   ·讨论第115-116页
   ·小结第116-118页
结论第118-120页
参考文献第120-134页
附录第134-140页
作者简介及科研成果第140-141页
致谢第141-142页

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