| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 绪论 | 第8-18页 |
| ·怪柳简介 | 第8页 |
| ·植物的抗旱耐盐机制 | 第8-11页 |
| ·细胞内的渗透调节机制 | 第9-10页 |
| ·蛋白类保护剂 | 第10页 |
| ·抗氧化防御系统 | 第10-11页 |
| ·超氧化物歧化酶(SOD)基因概述 | 第11-14页 |
| ·SOD的分类 | 第11页 |
| ·SOD的特点及研究进展 | 第11-13页 |
| ·SOD与植物抗逆性的关系 | 第13-14页 |
| ·RACE技术 | 第14-15页 |
| ·酿酒酵母作为外源基因表达系统的研究进展 | 第15-16页 |
| ·用于酿酒酵母基因表达的两类载体 | 第15-16页 |
| ·酿酒酵母表达外源基因的特点 | 第16页 |
| ·本项研究的目的及意义 | 第16-18页 |
| 2 怪柳 MnSOD基因的克隆 | 第18-32页 |
| ·实验材料与试剂 | 第18-19页 |
| ·植物材料 | 第18页 |
| ·酶类及试剂盒 | 第18页 |
| ·杂交检测试剂 | 第18-19页 |
| ·总 RNA提取 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-26页 |
| ·5'KACE引物的设计 | 第19页 |
| ·MnSOD基因的5'RACE克隆 | 第19-22页 |
| ·RACE片段的克隆与测序 | 第22-24页 |
| ·MnSOD基因在怪柳中表达的研究 | 第24-26页 |
| ·结果与分析 | 第26-32页 |
| ·MnSOD基因的5’端序列的获得 | 第26-27页 |
| ·MnSOD基因 RACE片段的克隆与测序 | 第27-28页 |
| ·怪柳 MnSOD基因的序列分析 | 第28-30页 |
| ·盐胁迫后的 MnSOD基因在怪柳中的表达 | 第30-32页 |
| 3 MnSOD基因酵母表达载体的构建 | 第32-42页 |
| ·实验材料 | 第32-35页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·酶和试剂 | 第32-34页 |
| ·培养基 | 第34页 |
| ·实验仪器 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·目的片段的获得及与表达载体的连接 | 第35页 |
| ·大肠杆菌 Top10F’感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35-36页 |
| ·重组质粒的提取 | 第36页 |
| ·重组质粒的 PCR扩增和双酶切检测 | 第36页 |
| ·重组质粒pYES-SOD的酵母遗传转化 | 第36-38页 |
| ·转化酵母的菌落 PCR检测 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-42页 |
| ·MnSOD基因的获得及双酶切 | 第38-39页 |
| ·酵母穿梭质粒pYES2的双酶切 | 第39页 |
| ·酵母重组表达载体的获得 | 第39-40页 |
| ·pYES-SOD及载体pYES2的酵母遗传转化 | 第40页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)的菌落 PCR检测 | 第40-42页 |
| 4 重组酵母 INVScl(pYES-SOD)的抗逆性分析 | 第42-50页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-44页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)的酶活性检测 | 第42-43页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)的 NaCl胁迫处理 | 第43页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)的 Na_2CO_3胁迫处理 | 第43页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)的NaHCO_3胁迫处理 | 第43-44页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)的旱胁迫处理 | 第44页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)的紫外线胁迫处理 | 第44页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)的高温胁迫处理 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-48页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)的 MnSOD酶活性提高 | 第44-45页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)重组酵母的抗 NaCl能力提高 | 第45页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)重组酵母的抗盐碱性提高 | 第45-46页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)重组酵母的耐干旱性增强 | 第46-47页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)重组酵母对紫外线诱变的抗性提高 | 第47页 |
| ·INVScl(pYES-SOD)重组酵母对高温胁迫的抗性 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 独创性声明 | 第60页 |
| 学位论文版权使用授权节 | 第60页 |
