| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-42页 |
| 第一节 干扰素及其研究进展 | 第14-29页 |
| ·概况 | 第14-20页 |
| ·I型干扰素分子结构 | 第20-21页 |
| ·I型干扰素受体的研究进展 | 第21-23页 |
| ·干扰素的信号传递 | 第23-24页 |
| ·干扰素与受体作用的分子机理 | 第24-28页 |
| ·干扰素的抗病毒机理 | 第28-29页 |
| 第二节 噬菌体展示及随机肽库技术 | 第29-36页 |
| ·噬菌体展示及其原理 | 第29-32页 |
| ·随机肽库技术 | 第32-33页 |
| ·随机肽库的应用 | 第33-36页 |
| 第三节 小肽类药物的研究进展 | 第36-41页 |
| ·小分子短肽模拟细胞因子的可行性 | 第36-37页 |
| ·拮抗细胞因子活性的小分子短肽 | 第37-39页 |
| ·模拟细胞因子活性的小分子短肽 | 第39-41页 |
| 第四节 本论文的研究目的和意义 | 第41-42页 |
| 第二章 应用噬菌体随机肽库技术筛选IFN-α2b抗原表位 | 第42-64页 |
| 第一节 材料与方法 | 第43-51页 |
| ·实验材料 | 第43-47页 |
| ·实验方法 | 第47-51页 |
| ·抗IFN-α2b多克隆抗体的制备 | 第47页 |
| ·Protein-G磁性微球捕获Anti-IFN多抗 | 第47页 |
| ·随机12肽库的生物淘筛 | 第47页 |
| ·噬菌体滴度的测定 | 第47-48页 |
| ·噬菌体的扩增和纯化 | 第48页 |
| ·单个噬菌斑的扩增 | 第48页 |
| ·阳性噬菌体克隆的鉴定 | 第48-49页 |
| ·噬菌体单链DNA的制备 | 第49页 |
| ·DNA序列测定及同源性分析 | 第49页 |
| ·噬菌体封闭抗体实验 | 第49页 |
| ·噬菌体免疫实验 | 第49-51页 |
| 第二节 结果 | 第51-59页 |
| ·噬菌体随机12肽库的淘筛 | 第51页 |
| ·阳性噬菌体克隆的鉴定 | 第51-54页 |
| ·阳性噬菌体克隆的聚类分析 | 第54-55页 |
| ·阳性噬菌体克隆的DNA序列测定及同源性分析 | 第55-57页 |
| ·噬菌体封闭抗体实验 | 第57-58页 |
| ·噬菌体抗体的免疫反应实验 | 第58-59页 |
| 第三节讨论与小结 | 第59-64页 |
| 第三章 绿色荧光蛋白-干扰素α2b融合基因的构建与表达 | 第64-87页 |
| 第一节 材料与方法 | 第64-77页 |
| ·实验材料 | 第64-67页 |
| ·实验方法 | 第67-77页 |
| ·GFP与IFN-α2b融合基因片段的获得及原核表达载体的构建 | 第67-73页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及纯化 | 第73页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第73-74页 |
| ·免疫印迹分析 | 第74页 |
| ·WISH细胞的培养 | 第74-75页 |
| ·融合蛋白与IFN受体的结合实验 | 第75页 |
| ·VSV病毒的扩增 | 第75-76页 |
| ·VSV病毒滴度的测定 | 第76页 |
| ·融合蛋白抗病毒活性的测定 | 第76-77页 |
| 第二节 结果 | 第77-83页 |
| ·外周血淋巴细胞总RNA的提取 | 第77页 |
| ·IFN基因的扩增、序列测定以及同源性比对 | 第77-79页 |
| ·含有GFP-IFN-α2b融合基因重组质粒的鉴定 | 第79-80页 |
| ·融合基因在大肠杆菌中的表达及分析 | 第80页 |
| ·融合蛋白特征性荧光的检测 | 第80-81页 |
| ·GFP-α2b- IFN 与 IFN 受体结合能力的考察 | 第81-82页 |
| ·GFP-IFN-α2b抗病毒活性的测定 | 第82-83页 |
| 第三节 讨论 | 第83-87页 |
| 第四章 应用噬菌体随机肽库技术筛选 IFN-α2b 的拮抗肽 | 第87-110页 |
| 第一节 材料与方法 | 第87-94页 |
| ·实验材料 | 第87-89页 |
| ·实验方法 | 第89-94页 |
| ·WISH细胞的培养 | 第89页 |
| ·活细胞筛选板的制备 | 第89页 |
| ·细胞ELISA板的制备 | 第89页 |
| ·细胞淘筛 | 第89-90页 |
| ·Anti-IFN多抗淘筛 | 第90页 |
| ·细胞固定方法考察 | 第90-91页 |
| ·洗脱方法的考察 | 第91页 |
| ·阳性噬菌体克隆的鉴定 | 第91-92页 |
| ·阳性噬菌体克隆的竞争抑制实验 | 第92页 |
| ·阳性噬菌体克隆的细胞免疫组化 | 第92页 |
| ·阳性噬菌体克隆的DNA序列测定及同源性分析 | 第92-93页 |
| ·竞争性细胞受体结合实验 | 第93页 |
| ·合成肽对干扰素抗病毒活性的影响 | 第93-94页 |
| 第二节 结果 | 第94-106页 |
| ·细胞淘筛及富集效果分析 | 第94页 |
| ·抗体淘筛及富集效果分析 | 第94-97页 |
| ·阳性噬菌体克隆的鉴定 | 第97-99页 |
| ·细胞免疫组化 | 第99-100页 |
| ·阳性噬菌体克隆的聚类分析 | 第100-101页 |
| ·阳性噬菌体DNA序列测定及同源性分析 | 第101-103页 |
| ·七肽合成及分析 | 第103-106页 |
| 第三节 讨论 | 第106-110页 |
| 第五章 应用噬菌体随机肽库技术筛选 IFN-α2b 的模拟肽 | 第110-127页 |
| 第一节 材料与方法 | 第111-114页 |
| ·实验材料 | 第111页 |
| ·实验方法 | 第111-114页 |
| ·WISH细胞的培养 | 第111页 |
| ·活细胞筛选板的制备 | 第111页 |
| ·细胞ELISA板的制备 | 第111页 |
| ·功能筛选 | 第111-112页 |
| ·阳性噬菌体克隆的鉴定 | 第112页 |
| ·阳性噬菌体克隆的DNA序列测定及同源性分析 | 第112页 |
| ·细胞免疫组化 | 第112-113页 |
| ·合成肽的竞争性受体结合实验 | 第113页 |
| ·合成肽的抗病毒活性检测 | 第113-114页 |
| 第二节 结果 | 第114-121页 |
| ·功能筛选富集效果的分析 | 第114页 |
| ·阳性噬菌体克隆的鉴定 | 第114-116页 |
| ·阳性噬菌体DNA序列测定及同源性分析 | 第116-117页 |
| ·细胞免疫组化 | 第117-118页 |
| ·七肽合成及分析 | 第118-121页 |
| 第三节 讨论 | 第121-127页 |
| 总结与展望 | 第127-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-142页 |
| 附录 | 第142-153页 |
| 在学期间发表论文 | 第153页 |
