| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 中英文缩写词表 | 第8-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-27页 |
| ·脂肪酶研究概况 | 第13-20页 |
| ·脂肪酶的来源与分布 | 第13页 |
| ·脂肪酶的获取 | 第13-14页 |
| ·脂肪酶的结构 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶的生物学特性 | 第15-17页 |
| ·脂肪酶应用 | 第17-20页 |
| ·胰脂肪酶研究进展 | 第20-24页 |
| ·胰脂肪酶家族概述 | 第20页 |
| ·胰脂肪酶结构和生理功能 | 第20-22页 |
| ·影响胰脂肪酶的因素 | 第22-23页 |
| ·胰腺脂肪酶应用前景 | 第23-24页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第24-27页 |
| ·巴斯德毕赤酵母宿主菌 | 第25页 |
| ·巴斯德毕赤酵母的表达载体 | 第25-26页 |
| ·外源基因在巴斯德毕赤酵母中的表达 | 第26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的应用前景 | 第26-27页 |
| 2 本研究立题依据、研究目标、内容和技术路线 | 第27-29页 |
| ·立题依据 | 第27页 |
| ·研究目标 | 第27-28页 |
| ·研究内容 | 第28页 |
| ·技术路线 | 第28-29页 |
| 3 材料与方法 | 第29-43页 |
| ·材料与仪器 | 第29-32页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·相关溶液和缓冲液的配置 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-43页 |
| ·猪胰腺脂肪酶基因(PPL)的克隆 | 第32-36页 |
| ·P.pastoris/pPICZαA-PPL表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·重组表达载体pPICZαA-PPL的毕赤酵母细胞转化及鉴定 | 第38-40页 |
| ·高RNA表达水平转化子的Real-Time RT-PCR筛选 | 第40-41页 |
| ·重组PPL的诱导表达 | 第41页 |
| ·蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第41-42页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第42页 |
| ·PPL的活性检测 | 第42-43页 |
| 4 实验结果与分析 | 第43-53页 |
| ·PPL基因cDNA的克隆与分析 | 第43-45页 |
| ·总RNA的提取 | 第43页 |
| ·PPL基因cDNA RT-PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·PPL基因的TA克隆 | 第44页 |
| ·克隆重组质粒的双酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·pPICZαA-PPL重组表达质粒的构建及鉴定 | 第45-47页 |
| ·pPICZαA质粒的双酶切 | 第45页 |
| ·阳性克隆的PCR检测 | 第45-46页 |
| ·pPICZαA-PPL重组表达质粒的双酶切鉴定与测序 | 第46-47页 |
| ·P.PASTORIs/PPICZαA-PPL表达菌株的转化与筛选 | 第47-49页 |
| ·重组表达载体质粒的线性化 | 第47-48页 |
| ·PCR检测表达转化子菌株 | 第48页 |
| ·Real-Time RT-PCR对转化子RNA表达量的检测 | 第48-49页 |
| ·PPL在P.PASTORIS中的表达、纯化 | 第49-52页 |
| ·表达时间,表达量和菌体密度的关系 | 第49-50页 |
| ·目的蛋白Ni亲和层析 | 第50-51页 |
| ·纯化蛋白浓度测定 | 第51-52页 |
| ·纯化PPL的活性检测 | 第52-53页 |
| 5 讨论 | 第53-57页 |
| ·胰腺组织总RNA的提取 | 第53页 |
| ·PPL基因的克隆 | 第53页 |
| ·PPL基因在毕赤酵母中的表达 | 第53-55页 |
| ·表达体系的选择 | 第53-54页 |
| ·PPL的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·活性测定分析 | 第55-57页 |
| 6 结论与展望 | 第57-59页 |
| ·PPL定量酶学特性分析 | 第57页 |
| ·优化PPL的发酵工艺研究 | 第57页 |
| ·PPL的糖基化研究 | 第57-58页 |
| ·改造PPL的分子结构提高其活性范围 | 第58页 |
| ·PPL在动物生产中的应用 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
