| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 引言 | 第12页 |
| 第一章 转基因鱼研究概况 | 第12-19页 |
| 1. 转基因鱼中常用的基因介绍 | 第13-14页 |
| 2 启动子的克隆方法 | 第14-16页 |
| 3. 基因转移的方法 | 第16-18页 |
| ·显微注射法 | 第17页 |
| ·精子载体法 | 第17页 |
| ·电穿孔法 | 第17页 |
| ·逆转录病毒感染法 | 第17-18页 |
| ·转座子法 | 第18页 |
| 4. 转基因鱼的应用前景 | 第18-19页 |
| 第二章 基因组步移技术克隆稀有鮈鲫角蛋白18 基因序列及序列分析 | 第19-39页 |
| 1. 材料和方法 | 第19-27页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·实验动物 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-23页 |
| ·稀有鮈鲫基因组DNA 的提取 | 第19-20页 |
| ·引物设计与合成 | 第20页 |
| ·PCR 扩增和扩增产物检测 | 第20-21页 |
| ·PCR 产物回收 | 第21-22页 |
| ·与T 载体连接 | 第22-23页 |
| ·序列测定和分析 | 第23页 |
| ·基因组步移法扩增稀有鮈鲫keratin 18 上游和下游序列 | 第23-27页 |
| ·引物设计 | 第23页 |
| ·稀有鮈鲫基因组DNA 的酶切检测 | 第23-24页 |
| ·稀有鮈鲫基因组DNA 的大量酶切构建基因组步移文库 | 第24页 |
| ·基因组DNA 酶切产物的纯化 | 第24-25页 |
| ·纯化后的酶切产物与Genomewalker Adaptor 连接 | 第25页 |
| ·PCR 扩增 | 第25-26页 |
| ·序列分析 | 第26-27页 |
| 2 .结果与分析 | 第27-36页 |
| ·稀有鮈鲫角蛋白18 基因的部分序列的克隆 | 第27-28页 |
| ·稀有鮈鲫角蛋白18 基因步移结果 | 第28-30页 |
| ·稀有鮈鲫角蛋白18 基因序列在NCBI 上的搜索 | 第30-31页 |
| ·GC 含量分析 | 第31页 |
| ·稀有鮈鲫角蛋白18 基因序列开放阅读框的分析预测 | 第31-35页 |
| ·稀有鮈鲫角蛋白18 的三维结构 | 第35-36页 |
| 3 讨论 | 第36-39页 |
| ·稀有鮈鲫角蛋白18 基因序列与斑马鱼角蛋白18 基因序列的比较 | 第36-37页 |
| ·角蛋白的特性与功能 | 第37-39页 |
| 第三章 稀有鮈鲫角蛋白18 基因启动子的克隆和分析 | 第39-47页 |
| 1. 材料和方法 | 第39-44页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·实验动物 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-44页 |
| ·稀有鮈鲫基因组DNA 的提取 | 第39-40页 |
| ·引物设计与合成 | 第40页 |
| ·基因组步移文库的构建 | 第40页 |
| ·稀有鮈鲫基因组DNA 的酶切检测 | 第40-41页 |
| ·稀有鮈鲫基因组DNA 的大量酶切构建基因组步移文库 | 第41-42页 |
| ·纯化后的酶切产物与Genomewalker Adaptor 连接 | 第42页 |
| ·PCR 扩增 | 第42-43页 |
| ·序列分析 | 第43-44页 |
| 2. 结果 | 第44-46页 |
| ·步移的结果 | 第44页 |
| ·稀有鮈鲫角蛋白18 基因启动子序列拼接 | 第44-45页 |
| ·稀有鮈鲫角蛋白18 启动子序列经分析得到的各个调控因子的序列 | 第45-46页 |
| 3. 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 红色荧光蛋白表达载体以及转红色荧光蛋白基因稀有鮈鲫的构建 | 第47-58页 |
| 1. 材料和方法 | 第47-54页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·菌株和克隆载体 | 第47页 |
| ·酶与试剂盒 | 第47页 |
| ·主要实验仪器 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-54页 |
| ·引物设计 | 第47-48页 |
| ·启动子的PCR 改造及产物回收 | 第48页 |
| ·PCR 回收产物的酶切 | 第48-49页 |
| ·红色荧光蛋白基因质粒和含转座酶基因质粒的酶切 | 第49-51页 |
| ·红色荧光蛋白表达载体质粒和含转座酶基因质粒的转化 | 第49-50页 |
| ·蓝白斑初步筛选转化子 | 第50页 |
| ·红色荧光蛋白表达载体质粒和含转座酶基因质粒的抽提 | 第50页 |
| ·红色荧光蛋白表达载体质粒和含转座酶基因质粒的酶切 | 第50-51页 |
| ·两种酶切方式的启动子和两种质粒酶切后纯化回收 | 第51-52页 |
| ·两种酶切方式的启动子纯化 | 第51-52页 |
| ·两种质粒酶切后载体大片段的回收和纯化 | 第52页 |
| ·红色荧光蛋白表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·启动子与红色荧光蛋白表达载体的连接 | 第52页 |
| ·重组载体的转化及筛选 | 第52-53页 |
| ·稀有鮈鲫的饲养及配对 | 第53页 |
| ·显微注射及转基因稀有鮈鲫的培养 | 第53页 |
| ·荧光显微镜初步检测RFP 的表达 | 第53-54页 |
| 2. 结果与分析 | 第54-56页 |
| ·启动子的PCR 改造及内切酶消化 | 第54-55页 |
| ·重组红色荧光蛋白载体和含转座酶基因载体的双酶切鉴定 | 第55-56页 |
| ·RFP 在转基因稀有鮈鲫中的表达 | 第56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
