中文摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
前言 | 第9-10页 |
1.文献综述 | 第10-15页 |
·DEAD-box蛋白家族的结构特征 | 第10-11页 |
·DEAD-box家族蛋白的功能 | 第11-12页 |
·转录起始 | 第11页 |
·mRNA前体的剪接 | 第11页 |
·核糖体大小亚基的生物发生 | 第11页 |
·RNA转运 | 第11-12页 |
·翻译的起始 | 第12页 |
·RNA降解 | 第12页 |
·DEAD-box主要亚家族蛋白的研究进展 | 第12-15页 |
·eIF-4A | 第12-13页 |
·p68 | 第13页 |
·vasa和abstrakt | 第13-15页 |
2.恶性疟原虫abstrakt同源基因的克隆及DEAD-box家族蛋白序列的分析 | 第15-41页 |
·研究背景,研究目的和研究方案 | 第15-16页 |
·研究背景与研究目的 | 第15页 |
·研究方案 | 第15-16页 |
·材料与方法 | 第16-25页 |
·DNA文库和基因组文库 | 第16-17页 |
·疟原虫的培养和纯化 | 第17页 |
·DNA、RNA的提取及RNA的纯化 | 第17-18页 |
·简并引物的设计及PCR扩增、DNA检测与纯化 | 第18-19页 |
·PCR产物(目的DNA片段)的克隆 | 第19-20页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第20页 |
·DNA双脱氧测序 | 第20-22页 |
·放射性同位素标记DNA探针的制备—随机寡核苷酸引物合成法 | 第22页 |
·cDNA文库和基因组文库的筛选 | 第22-23页 |
·Southern杂交分析 | 第23-24页 |
·Northern杂交分析 | 第24页 |
·序列分析 | 第24-25页 |
·实验结果 | 第25-38页 |
·CH1、FH1和FH2的克隆及其鉴定 | 第25-29页 |
·FH1F全长基因的克隆及其鉴定 | 第29-35页 |
·DEAD-box蛋白家族系统发生分析 | 第35-38页 |
·讨论 | 第38-41页 |
·在P.falciparum基因组中只含有一个FH1H拷贝 | 第38页 |
·P.falciparum基因组含有多个不同的DEAD-box蛋白基因 | 第38页 |
·FH1为探针的Northern杂交分析 | 第38页 |
·P.falciparumabstrakt蛋白具有典型的abstrakt蛋白结构特征 | 第38-39页 |
·不同亚家族的DEAD-box蛋白具有其亚家族的结构特征 | 第39-40页 |
·PCR结合探针噬斑杂交方法可以大大提高筛选文库的速度和效率 | 第40-41页 |
3.Plasmodium cynomolgi eIF-4A的克降、重组蛋白的表达和纯化及其ATPase活性检测 | 第41-58页 |
·研究背景、研究目的和研究方案 | 第41-42页 |
·研究背景与研究目的 | 第41页 |
·研究方案 | 第41-42页 |
·材料与方法 | 第42-48页 |
·有关试剂的配制 | 第42-45页 |
·重组表达载体的构建 | 第45-46页 |
·重组克隆的表达 | 第46-47页 |
·表达蛋白的粗提取 | 第47页 |
·Ni~(2-)柱亲和层析法纯化带His6标记的目的蛋白及其蛋白质复性 | 第47页 |
·ATPase活性检测 | 第47-48页 |
·结果 | 第48-56页 |
·CHlF全长cDNA的结构 | 第48-51页 |
·CHlF是eIF-4A同源物 | 第51-54页 |
·重组蛋白CHlF的过量表达、纯化和鉴定 | 第54-55页 |
·重组蛋白CHlF ATPase活性检测 | 第55-56页 |
·讨论 | 第56-58页 |
·cDNA克隆CHlF为eIF-4A;所表达的重组蛋白为eIF-4A同源物 | 第56页 |
·重组蛋白CHlF ATP酶活性分析 | 第56-58页 |
结论 | 第58-59页 |
一、恶性疟原虫abstrakt同源基因的克隆及DEAD-box蛋白序列分析 | 第58页 |
二、食蟹猴疟原虫eIF-4A同源蛋白的cDNA克隆、重组蛋白的表达和纯化及其ATP酶活性检测 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-67页 |
附表1 | 第67-68页 |
在读期间发表论文题录 | 第68-69页 |
致谢 | 第69页 |