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恶性疟原虫abstrakt同源基因的克隆及食蟹猴疟原虫eIF-4A同源蛋白的cDNA克隆、表达和ATP酶活性研究

中文摘要第1-7页
ABSTRACT第7-9页
前言第9-10页
1.文献综述第10-15页
   ·DEAD-box蛋白家族的结构特征第10-11页
   ·DEAD-box家族蛋白的功能第11-12页
     ·转录起始第11页
     ·mRNA前体的剪接第11页
     ·核糖体大小亚基的生物发生第11页
     ·RNA转运第11-12页
     ·翻译的起始第12页
     ·RNA降解第12页
   ·DEAD-box主要亚家族蛋白的研究进展第12-15页
     ·eIF-4A第12-13页
     ·p68第13页
     ·vasa和abstrakt第13-15页
2.恶性疟原虫abstrakt同源基因的克隆及DEAD-box家族蛋白序列的分析第15-41页
   ·研究背景,研究目的和研究方案第15-16页
     ·研究背景与研究目的第15页
     ·研究方案第15-16页
   ·材料与方法第16-25页
     ·DNA文库和基因组文库第16-17页
     ·疟原虫的培养和纯化第17页
     ·DNA、RNA的提取及RNA的纯化第17-18页
     ·简并引物的设计及PCR扩增、DNA检测与纯化第18-19页
     ·PCR产物(目的DNA片段)的克隆第19-20页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第20页
     ·DNA双脱氧测序第20-22页
     ·放射性同位素标记DNA探针的制备—随机寡核苷酸引物合成法第22页
     ·cDNA文库和基因组文库的筛选第22-23页
     ·Southern杂交分析第23-24页
     ·Northern杂交分析第24页
     ·序列分析第24-25页
   ·实验结果第25-38页
     ·CH1、FH1和FH2的克隆及其鉴定第25-29页
     ·FH1F全长基因的克隆及其鉴定第29-35页
     ·DEAD-box蛋白家族系统发生分析第35-38页
   ·讨论第38-41页
     ·在P.falciparum基因组中只含有一个FH1H拷贝第38页
     ·P.falciparum基因组含有多个不同的DEAD-box蛋白基因第38页
     ·FH1为探针的Northern杂交分析第38页
     ·P.falciparumabstrakt蛋白具有典型的abstrakt蛋白结构特征第38-39页
     ·不同亚家族的DEAD-box蛋白具有其亚家族的结构特征第39-40页
     ·PCR结合探针噬斑杂交方法可以大大提高筛选文库的速度和效率第40-41页
3.Plasmodium cynomolgi eIF-4A的克降、重组蛋白的表达和纯化及其ATPase活性检测第41-58页
   ·研究背景、研究目的和研究方案第41-42页
     ·研究背景与研究目的第41页
     ·研究方案第41-42页
   ·材料与方法第42-48页
     ·有关试剂的配制第42-45页
     ·重组表达载体的构建第45-46页
     ·重组克隆的表达第46-47页
     ·表达蛋白的粗提取第47页
     ·Ni~(2-)柱亲和层析法纯化带His6标记的目的蛋白及其蛋白质复性第47页
     ·ATPase活性检测第47-48页
   ·结果第48-56页
     ·CHlF全长cDNA的结构第48-51页
     ·CHlF是eIF-4A同源物第51-54页
     ·重组蛋白CHlF的过量表达、纯化和鉴定第54-55页
     ·重组蛋白CHlF ATPase活性检测第55-56页
   ·讨论第56-58页
     ·cDNA克隆CHlF为eIF-4A;所表达的重组蛋白为eIF-4A同源物第56页
     ·重组蛋白CHlF ATP酶活性分析第56-58页
结论第58-59页
 一、恶性疟原虫abstrakt同源基因的克隆及DEAD-box蛋白序列分析第58页
 二、食蟹猴疟原虫eIF-4A同源蛋白的cDNA克隆、重组蛋白的表达和纯化及其ATP酶活性检测第58-59页
参考文献第59-67页
附表1第67-68页
在读期间发表论文题录第68-69页
致谢第69页

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