| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-8页 |
| HroN基因在毕赤酵母中的克隆表达与活性检测 | 第8-56页 |
| 前言 | 第8-19页 |
| 1 Harpin蛋白的研究概况 | 第8-16页 |
| 2 毕赤酵母表达系统 | 第16-18页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 实验材料 | 第19-25页 |
| 1 载体与菌种 | 第19页 |
| 2 酶与试剂 | 第19页 |
| 3 引物合成 | 第19页 |
| 4 培养基及溶液的配制 | 第19-25页 |
| 实验方法 | 第25-39页 |
| 1 目的片段的PCR扩增及其T-clone载体的构建 | 第25-28页 |
| 2 重组质粒pPIC6αA-hrpN的构建 | 第28-33页 |
| 3 重组表达质粒转化Pichia pastoris X-33 | 第33-34页 |
| 4 重组酵母菌X-33(pPIC6αA-hrpN)的筛选与鉴定 | 第34-36页 |
| 5 筛选重组子 | 第36页 |
| 6 Harpin_(Ea)在酵母中的诱导表达 | 第36页 |
| 7 重组酵母表达产物harpin_(Ea)的检测 | 第36-37页 |
| 8 进一步筛选高表达重组菌 | 第37页 |
| 9 诱导条件的摸索 | 第37-38页 |
| 10 表达产物的纯化 | 第38页 |
| 11 表达产物的活性测定 | 第38-39页 |
| 实验结果 | 第39-44页 |
| 1 目的片段的PCR扩增及重组质粒的酶切鉴定 | 第39页 |
| 2 重组表达菌株的鉴定 | 第39-41页 |
| 3 高表达酵母工程菌株的筛选以及酵母工程菌的表达和检测 | 第41-42页 |
| 4 表达产物的纯化 | 第42页 |
| 5 表达产物活性测定结果 | 第42-44页 |
| 讨论 | 第44-50页 |
| 1 目的基因的选择 | 第44页 |
| 2 表达系统的选择 | 第44页 |
| 3 hrpN序列的引物设计和PCR扩增 | 第44页 |
| 4 酵母分泌信号肽的应用及影响 | 第44-45页 |
| 5 His尾巴的应用 | 第45页 |
| 6 转化子的表型及产生 | 第45-46页 |
| 7 酵母工程菌的筛选 | 第46页 |
| 8 Harpin_(Ea)在毕赤酵母中的诱导表达 | 第46-47页 |
| 9 糖基化问题 | 第47页 |
| 10 Harpin_(Ea)在酵母中表达的影响因素 | 第47-50页 |
| 小结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 发表论文 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
