| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 一 前言 | 第14-51页 |
| 1．0 引言 | 第14页 |
| 1．1 蓝藻及其特点 | 第14-17页 |
| 1．2 蓝藻基因工程 | 第17-28页 |
| 1．2．1 蓝藻功能基因组的研究 | 第17-20页 |
| 1．2．2 蓝藻基因工程载体 | 第20-21页 |
| 1．2．3 向蓝藻中转入外源基因的技术 | 第21-23页 |
| 1．2．4 外源基因在蓝藻中的表达 | 第23-28页 |
| 1．3 蓝藻的光合作用 | 第28-33页 |
| 1．3．1 光合作用的基本概念 | 第28-29页 |
| 1．3．2 光合作用的特点 | 第29-30页 |
| 1．3．3 蓝藻光合作用的特点 | 第30-31页 |
| 1．3．4 研究光合作用的主要手段和方法 | 第31-33页 |
| 1．4 基因工程对光合作用的调控 | 第33-49页 |
| 1．4．1 第一次绿色革命 | 第34-35页 |
| 1．4．2 第二次绿色革命 | 第35-36页 |
| 1．4．3 基因工程是改善光合效率的锐利武器 | 第36-38页 |
| 1．4．4 Calvin循环基因工程研究概述 | 第38-40页 |
| 1．4．5 果糖-1,6-二磷酸酶 | 第40-43页 |
| 1．4．6 果糖-1,6-二磷酸醛缩酶 | 第43-45页 |
| 1．4．7 丙糖磷酸异构酶 | 第45-46页 |
| 1．4．8 温室效应 | 第46-47页 |
| 1．4．9 选择FBPase、ALD和TPI的原因 | 第47-49页 |
| 1．5 本研究的目的和意义以及内容 | 第49-51页 |
| 1．5．1 本研究的目的和意义 | 第49页 |
| 1．5．2 本研究的内容 | 第49-51页 |
| 二 材料与方法 | 第51-67页 |
| 2．1 实验材料 | 第51-54页 |
| 2．1．1 质粒、菌株和蓝藻细胞株 | 第51-52页 |
| 2．1．2 工具酶和试剂 | 第52-53页 |
| 2．1．3 主要仪器 | 第53-54页 |
| 2．2 实验方法 | 第54-67页 |
| 2．2．1 蓝藻的培养、纯化及保存 | 第54-55页 |
| 2．2．2 穿梭表达载体pDC-fbp、pRL-AT和pDC-ATF的构建 | 第55-59页 |
| 2．2．3 蓝藻的转化与筛选 | 第59-60页 |
| 2．2．4 转基因藻的形态观察 | 第60页 |
| 2．2．5 转基因藻的分子检测 | 第60-61页 |
| 2．2．6 转基因蓝藻中的蛋白定量 | 第61-62页 |
| 2．2．7 转基因蓝藻中酶活性的检测 | 第62-65页 |
| 2．2．8 转基因藻的生理活性检测 | 第65-67页 |
| 三 结果与分析 | 第67-138页 |
| 3．1 穿梭表达载体pDC-fbp的构建和转基因藻的获得 | 第67-80页 |
| 3．1．1 穿梭表达载体pDC-fbp的构建图 | 第67-68页 |
| 3．1．2 小麦叶绿体FBPase核苷酸序列及氨基酸顺序 | 第68页 |
| 3．1．3 PCR产物FBPase基因的鉴定 | 第68-69页 |
| 3．1．4 中间表达载体pRL-fbp的鉴定 | 第69页 |
| 3．1．5 穿梭表达载体pDC-fbp的鉴定 | 第69-70页 |
| 3．1．6 三亲接合转移和转基因蓝藻的筛选 | 第70-73页 |
| 3．1．7 转基因蓝藻的形态观察 | 第73页 |
| 3．1．8 转基因蓝藻分子水平的检测 | 第73-76页 |
| 3．1．9 转基因蓝藻的蛋白定量 | 第76-77页 |
| 3．1．10 转基因蓝藻中酶活性的检测 | 第77-80页 |
| 3．2 转pDC-fbp蓝藻生理活性的检测 | 第80-90页 |
| 3．2．1 生长曲线的测定 | 第80-83页 |
| 3．2．2 光合放氧活性的测定 | 第83-85页 |
| 3．2．3 CO_2同化速率的测定 | 第85-86页 |
| 3．2．4 室温吸收光谱的测定 | 第86-87页 |
| 3．2．5 低温荧光发射光谱的测定 | 第87-89页 |
| 3．2．6 动力学荧光的测定 | 第89-90页 |
| 3．3 穿梭表达载体pRL-AT的构建和转基因藻的获得 | 第90-102页 |
| 3．3．1 穿梭表达载体pDC-AT的构建图 | 第90-91页 |
| 3．3．2 水稻叶绿体ALD基因及其编码的氨基酸顺序和菠菜叶绿体TPI基因及其编码的氨基酸顺序 | 第91-92页 |
| 3．3．3 穿梭表达载体pRL-AT的酶切鉴定 | 第92-93页 |
| 3．3．4 三亲接合转移和转基因蓝藻的筛选 | 第93-95页 |
| 3．3．5 转基因藻的形态观察 | 第95-96页 |
| 3．3．6 转基因蓝藻分子水平的检测 | 第96-98页 |
| 3．3．7 转基因蓝藻的蛋白定量 | 第98-100页 |
| 3．3．8 转基因蓝藻中酶活性的检测 | 第100-102页 |
| 3．4 转pRL-AT蓝藻生理活性的检测 | 第102-113页 |
| 3．4．1 生长曲线的测定 | 第103-105页 |
| 3．4．2 光合放氧活性的测定 | 第105-108页 |
| 3．4．3 CO_2同化速率的检测 | 第108-109页 |
| 3．4．4 室温吸收光谱的测定 | 第109-110页 |
| 3．4．5 低温荧光发射光谱的测定 | 第110-112页 |
| 3．4．6 动力学荧光的测定 | 第112-113页 |
| 3．5 穿梭表达载体pDC-ATF的构建和转基因藻的获得 | 第113-127页 |
| 3．5．1 穿梭表达载体pDC-ATF的构建图 | 第113-114页 |
| 3．5．2 中间表达载体pRL-ATF的鉴定 | 第114-115页 |
| 3．5．3 中间表达载体pRL-ATF正反连的鉴定 | 第115-116页 |
| 3．5．4 穿梭表达载体pDC-ATF的鉴定 | 第116-117页 |
| 3．5．5 三亲接合转移和转基因蓝藻的筛选 | 第117-120页 |
| 3．5．6 转基因藻的形态观察 | 第120页 |
| 3．5．7 转基因蓝藻分子水平的检测 | 第120-123页 |
| 3．5．8 转基因蓝藻的蛋白定量 | 第123-124页 |
| 3．5．9 转基因蓝藻中酶活性的检测 | 第124-127页 |
| 3．6 转pDC-ATF蓝藻生理活性的检测 | 第127-138页 |
| 3．6．1 生长曲线的测定 | 第127-130页 |
| 3．6．2 放氧光合活性的测定 | 第130-132页 |
| 3．6．3 CO_2同化速率的检测 | 第132-133页 |
| 3．6．4 室温吸收光谱的测定 | 第133-134页 |
| 3．6．5 低温荧光发射光谱的测定 | 第134-136页 |
| 3．6．6 动力学荧光的测定 | 第136-138页 |
| 四 讨论 | 第138-146页 |
| 4．1 在基因水平上调控光合作用 | 第138页 |
| 4．2 选择FBPase、ALD和TPI作为基因工程的靶酶 | 第138-139页 |
| 4．3 用蓝藻基因工程调控光合作用 | 第139-140页 |
| 4．4 对本研究结果的讨论 | 第140-144页 |
| 4．5 靶酶调控光合作用的机理 | 第144-145页 |
| 4．6 通过本研究对靶酶获取的新信息 | 第145-146页 |
| 五 结论与展望 | 第146-150页 |
| 5．1 结论 | 第146-148页 |
| 5．2 展望 | 第148-150页 |
| 六 参考文献 | 第150-169页 |
| 附录 | 第169-171页 |
| 缩写表 | 第171-174页 |
| 图版 | 第174-182页 |
| 在学期间撰写与发表的论文 | 第182-183页 |
| 致谢 | 第183-184页 |
