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马铃薯淀粉合成酶Ⅲ基因cDNA的克隆及RNA干扰载体的构建

缩略语表第1-8页
摘要第8-9页
SUMMARY第9-10页
第一章 文献综述第10-28页
   ·淀粉合成机制第11-14页
   ·淀粉合成的关键酶研究进展第14-18页
     ·腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶第14-15页
     ·淀粉合成酶第15-16页
     ·淀粉分支酶第16-18页
     ·脱分支酶第18页
   ·马铃薯淀粉第18-22页
     ·马铃薯淀粉的基本性质第18-19页
     ·马铃薯变性淀粉的特点第19页
     ·直链淀粉的特性及应用第19-20页
     ·支链淀粉的特性及应用第20-21页
     ·淀粉的糊化、“老化”与淀粉的组成及结构第21-22页
     ·马铃薯淀粉的性质和磷酸第22页
       ·糊化特性和磷酸第22页
       ·淀粉老化和磷酸第22页
   ·RNA 干扰第22-26页
     ·RNAi 的作用机制第23-24页
       ·转录后基因沉默第23页
       ·转录水平基因沉默第23-24页
       ·翻译水平上的基因沉默第24页
     ·RNAi 在植物上的应用第24-26页
       ·植物基因功能的研究第24页
       ·植物抗病性的研究第24-25页
       ·植物雄性不育的研究第25页
       ·其它方面的应用第25-26页
     ·植物中RNA 干扰载体的构建第26页
   ·本研究的目的和意义第26-28页
第二章 马铃薯 SSIII 基因 cDNA 的克隆第28-42页
   ·前言第28页
   ·材料和方法第28-37页
     ·菌株、质粒和植物材料第28页
     ·试剂第28页
     ·细菌培养基第28页
     ·马铃薯组织培养基第28-29页
     ·引物设计第29页
     ·马铃薯叶片和块茎总RNA 的提取第29-30页
     ·RT-PCR 扩增马铃薯SSIII 基因的cDNA第30-31页
     ·克隆载体pBluescript SK+质粒的提取及酶切第31-32页
     ·扩增片段和酶切质粒的回收第32-33页
     ·大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备第33页
     ·重组子的连接与转化第33-34页
     ·蓝白斑筛选阳性克隆第34页
     ·阳性克隆的PCR 扩增和酶切鉴定第34-36页
     ·重组子的测序第36页
     ·序列比对分析第36-37页
   ·结果与分析第37-40页
     ·马铃薯块茎总RNA 的提取和质量分析第37页
     ·SSIII 基因cDNA 的扩增第37-38页
     ·阳性克隆的PCR 与酶切鉴定第38-39页
     ·SSIII 基因的测序第39-40页
     ·SSIII 基因的比对分析第40页
   ·讨论第40-42页
     ·RNA 的提取第40-41页
     ·SSIII 基因cDNA 的扩增第41页
     ·SSIII 基因的比对分析第41-42页
第三章 马铃薯SSIII 基因的生物信息学分析第42-46页
   ·前言第42页
   ·材料与方法第42页
   ·结果与分析第42-45页
     ·推导的SSIII 基因的氨基酸序列第42-43页
     ·马铃薯SSIII 基本理化性质的预测和分析第43页
     ·马铃薯SSIII 跨膜结构预测和分析第43页
     ·马铃薯SSIII 翻译后修饰的预测和分析第43-44页
     ·马铃薯SSIII 功能结构域的预测和分析第44页
     ·马铃薯SSIII 亚细胞定位的预测和分析第44-45页
     ·马铃薯SSIII 二级结构的预测和分析第45页
   ·讨论第45-46页
第四章 马铃薯SSIII 基因RNA 干扰载体的构建第46-65页
   ·前言第46页
   ·材料和方法第46-55页
     ·菌种、质粒和载体第46页
     ·酶和试剂第46页
     ·植物DNA 的小量提取第46-47页
     ·正义片段、反义片段和内含子的扩增第47-48页
     ·正义片段和内含子片段的连接第48-49页
     ·SSIII-1+SERK1 intron 片段重组子的构建第49-50页
     ·反义片段重组子的构建第50-51页
     ·RNA 干扰中间载体的构建第51-53页
     ·表达载体 pBI121 和 pBI-CIPP 的大量碱法提取第53页
     ·RNA 干扰表达载体的构建第53-55页
   ·结果与分析第55-63页
     ·正义片段、内含子片段和反义片段的扩增第55-56页
     ·SSIII-1+SERK1 intron 片段的扩增第56-57页
     ·重组子pSK-SIF 的PCR 和酶切鉴定第57-58页
     ·重组子pSK-AF 的PCR 和酶切鉴定第58页
     ·RNA 干扰中间载体的PCR 和酶切鉴定第58-60页
     ·干扰片段的测序、比对和二级结构的分析第60页
     ·RNA 干扰表达载体的PCR 扩增和酶切鉴定第60-63页
   ·讨论第63-65页
     ·重组子pSK-SIF 的构建第63页
     ·重组子pSK-SSIII-RNAi 的构建第63页
     ·干扰片段表达载体的构建第63-65页
第五章 干扰表达载体根癌农杆菌的转化第65-69页
   ·前言第65页
   ·材料和方法第65-67页
     ·菌株和质粒第65页
     ·酶和试剂第65页
     ·根癌农杆菌感受态细胞的制备第65-66页
     ·根癌农杆菌感受态细胞的冻融法转化第66页
     ·农杆菌Ti 质粒的碱法小量提取第66-67页
     ·农杆菌转化子的PCR 鉴定第67页
   ·结果与分析第67页
   ·讨论第67-69页
参考文献第69-74页
致谢第74-75页
作者介绍第75-76页
导师简介第76页

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