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家蚕气味结合蛋白基因的研究

中文摘要第1-15页
英文摘要第15-18页
第一章 文献综述第18-62页
 1 昆虫的化学感受与嗅觉机制第19-39页
   ·昆虫的化学感受第19页
   ·昆虫的化学感受器与类型第19-20页
   ·昆虫化学感受的相关蛋白第20-35页
     ·昆虫的气味结合蛋白第20-31页
     ·昆虫的气味受体第31-32页
     ·昆虫的化学感受蛋白第32-34页
     ·气味降解酶第34-35页
     ·感觉神经元膜蛋白第35页
   ·昆虫的嗅觉机制第35-37页
     ·昆虫嗅觉途径第35-37页
     ·昆虫嗅觉感受模型第37页
   ·昆虫嗅觉机制前景和应用意义第37-39页
 2 RNAi 及其在昆虫学研究中的应用第39-48页
   ·RNAi 的发现与发展第39-40页
   ·RNAi 的分子机制第40-42页
     ·起始阶段第41页
     ·效应阶段第41-42页
     ·扩增阶段第42页
   ·RNAi 的生物学意义第42-45页
     ·RNAi 抵御病毒感染第42-44页
     ·RNAi 抑制转座子运动第44页
     ·RNAi 参与异染色质的形成与维持第44页
     ·RNAi 参与机体的发育调控及生理代谢第44-45页
   ·RNAi 的系统性第45页
   ·RNAi 在昆虫中导入方式第45-47页
     ·昆虫RNAi 的导入方式第45-47页
       ·注射法第46页
       ·饲喂法第46-47页
       ·组织培养法第47页
   ·RNAi 在家蚕中的应用及前景第47-48页
 3 家蚕的遗传标记第48-62页
   ·家蚕遗传学研究的概况第48-49页
     ·近代的家蚕遗传学研究概况第48-49页
     ·现代的家蚕遗传学研究概况第49页
     ·家蚕作为遗传学研究材料的优点第49页
   ·家蚕的遗传标记第49-62页
     ·形态标记第50页
     ·生化标记第50页
     ·细胞学标记第50-51页
     ·分子标记第51-62页
第二章 主要试剂与常用实验方法第62-69页
 1 常用试剂第62-64页
   ·培养基第62页
     ·LB 液体培养基(Luria-Bertani Medium)第62页
     ·LB 固体培养基第62页
   ·常用溶液第62-64页
     ·Tris·EDTA(TE)缓冲液(pH8.0)第62页
     ·碱变性法质粒抽提缓冲液第62页
     ·氨苄青霉素(ampicillin,Amp)第62页
     ·RNaseA第62-63页
     ·CaCl_2(75 mmol/L)第63页
     ·3 mol/L NaAc(pH 5.2)第63页
     ·溴化乙锭(ethidium bromide,EB)第63页
     ·X-gal(2%,m/v)第63页
     ·IPTG第63页
     ·1.2 %琼脂糖(Agarose)第63页
     ·DEPC 处理水第63页
     ·TAE 电泳缓冲液(50×储存液,pH 约 8.5)第63-64页
 2 主要仪器设备第64页
 3 常用实验方法第64-69页
   ·碱裂解法少量制备质粒DNA第64-65页
   ·家蚕组织总RNA 提取第65页
   ·家蚕DNA 提取第65页
   ·CaC1_2 法制备E.coli 感受态细胞第65-66页
   ·Reverse Transcription-PCR 反应(RT-PCR)第66页
   ·PCR 扩增反应程序及加样体系第66-67页
   ·PCR 产物的回收第67页
   ·连接反应第67页
   ·重组DNA 的转化第67页
   ·重组质粒的筛选第67页
   ·限制性内切酶反应第67-68页
   ·家蚕OBP 基因表达半定量分析第68-69页
第三章 家蚕OBP 家族的生物信息学分析第69-84页
 1 材料与方法第69-70页
   ·主要数据库及软件第69-70页
     ·数据库及网址第69页
     ·所用生物信息学软件第69-70页
 2 结果与分析第70-83页
   ·家蚕OBP 家族核苷酸序列分析第70-76页
     ·家蚕OBP 家族基因染色体定位第70-71页
     ·家蚕OBP 家族基因结构分析第71-72页
     ·家蚕OBP 家族基因电子表达谱分析第72-73页
     ·家蚕OBP 家族基因进化分析与遗传距离第73-76页
   ·家蚕OBP 家族蛋白序列分析第76-83页
     ·家蚕OBP 蛋白生化特征第76页
     ·家蚕OBP 蛋白跨膜区和疏水性预测第76-79页
     ·家蚕OBP 蛋白氨基酸序列分析第79-83页
 3 结论与讨论第83-84页
第四章 家蚕潜成虫和成虫期PBP/GOBP 亚家族基因簇基因定位、表达与蚕蛾趋性研究第84-94页
 1 材料与方法第85-86页
   ·PBP/GOBP 亚家族基因序列获取与染色体定位第85-86页
   ·家蚕品种与组织选取和RT-PCR第86页
   ·基因表达水平分析第86页
   ·家蚕蛾的趋性测定第86页
 2 结果与分析第86-92页
   ·家蚕PBP/GOBP 亚家族基因簇基因在染色体上的定位与排布分析第86-88页
   ·家蚕PBP/GOBP 亚家族基因表达谱分析第88-92页
     ·羽化前1 天家蚕PBP/GOBP 亚家族基因的表达分析第88-89页
     ·羽化当日家蚕PBP/GOBP 亚家族基因的表达分析第89-90页
     ·家蚕蛹和成虫不同时期触角中PBP/GOBP 亚家族基因的表达分析第90-91页
     ·家蚕蛾的趋性测定第91-92页
 3 结论与讨论第92-94页
   ·家蚕PBP/GOBP 基因簇第92页
   ·家蚕PBP/GOBP 基因簇基因的表达与功能分析第92-94页
第五章 家蚕ABP 和ABPX 的表达与功能研究第94-112页
 1 材料与方法第94-98页
   ·家蚕ABP 和ABPX 的序列、结构与功能位点分析第94页
   ·不同发育阶段家蚕ABP 和ABPX 基因表达分析第94-95页
   ·基于RNAi 的家蚕ABP 和ABPX 功能研究第95-98页
     ·注射化学合成的dsRNA 研究家蚕ABP 和ABPX 的功能第95-96页
     ·口服细菌表达的dsRNA 研究家蚕ABP 和ABPX 的功能第96-98页
     ·RNAi 对家蚕对桑叶趋性的影响第98页
     ·RNAi 对家蚕发育的影响第98页
     ·RNAi 对基因表达的影响第98页
 2 结果与分析第98-109页
   ·家蚕ABP 和ABPX 的序列、结构与功能位点分析第98-101页
   ·不同发育阶段家蚕ABP 和ABPX 基因表达分析第101-104页
     ·家蚕胚胎期ABP 和ABPX 基因的表达第101页
     ·家蚕幼虫不同时期ABP 和ABPX 基因的表达第101-103页
     ·5 龄中期不同组织器官ABP 和ABPX 基因的表达第103-104页
   ·家蚕ABP 和ABPX 的RNAi第104-109页
     ·dsRNA 的合成与家蚕的处理第104-105页
     ·注射dsRNA 对家蚕的影响第105-106页
     ·口服细菌表达的dsRNA 对家蚕的影第106-109页
 3 结论与讨论第109-112页
   ·家蚕ABP 和ABPX 基因表达与功能分析第109-110页
   ·家蚕ABP 和ABPX 的RNAi 系统性与效应第110-111页
   ·口服细菌表达载体产生的dsRNA 用于昆虫RNAi 分析第111-112页
第六章 野桑蚕pbp、or1 和or3 基因的克隆与进化分析第112-123页
 1 材料与方法第113-114页
   ·野桑蚕蛾第113页
   ·试剂第113页
   ·野桑蚕基因的克隆与测序第113-114页
   ·基因序列分析第114页
   ·遗传距离和进化分析第114页
 2 结果与分析第114-119页
   ·野桑蚕和家蚕的PBP 和OR 基因变异分析第114-118页
   ·野桑蚕和家蚕的PBP 成熟蛋白和OR 蛋白的二级结构分析第118页
   ·野桑蚕和家蚕同源基因遗传距离分析第118页
   ·进化速率第118页
   ·5 种昆虫PBP 蛋白进化分析第118-119页
 3 结论与讨论第119-123页
   ·野桑蚕和家蚕的基因的变异及其与蛋白质功能的关系第119-122页
   ·野桑蚕和家蚕PBP 亚家族基因的进化比较第122-123页
第七章 昆虫GOBP 的分子进化分析第123-137页
 1 材料与方法第124-125页
   ·GOBP 蛋白及cDNA 序列获取第124页
   ·13 个物种GOBP 的氨基酸同源比对及聚类分析第124-125页
 2 结果分析第125-136页
   ·13 种昆虫GOBP 蛋白的聚类分析及氨基酸同源比对第125-131页
     ·13 种昆虫GOBP 聚类分析第125-126页
     ·13 种昆虫GOBP 蛋白氨基酸和核苷酸序列一致性与差异性分析第126-127页
     ·13 种昆虫GOBP 蛋白序列的遗传距离分析第127-131页
     ·13 种昆虫GOBP 氨基酸残基替代分析第131页
   ·13 种昆虫GOBP 蛋白基于氨基酸序列的ω分析第131-136页
   ·13 种昆虫GOBP 蛋白氨基酸序列分析第136页
 3 结论与讨论第136-137页
第八章 家蚕食性相关分子标记研究第137-146页
 1 材料与方法第138-140页
   ·家蚕品系及对人工饲料的摄食性鉴定第138页
   ·家蚕DNA 提取与检测第138页
   ·分子标记PCR第138-140页
     ·引物设计第138-139页
     ·RAPD-PCR 反应体系及条件设置第139-140页
     ·SSR-PCR 反应体系及条件设置第140页
 2 结果与分析第140-144页
   ·家蚕高摄食性和低摄食性纯系的摄食性调查第140页
   ·家蚕DNA 检测第140-141页
   ·分子标记分析第141-144页
     ·RAPD 标记分析第141页
     ·SSR 标记分析第141-144页
 3 结论与讨论第144-146页
第九章 结论第146-148页
参考文献第148-173页
致谢第173-174页
攻读学位期间发表的论文与研究成果第174页

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