| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-33页 |
| ·植物转录因子简介 | 第12-14页 |
| ·转录因子结构特点 | 第12-14页 |
| ·GRAS家族研究 | 第14-20页 |
| ·GRAS家族的结构特点 | 第14-15页 |
| ·GRAS家族功能 | 第15-18页 |
| ·LAS类基因研究进展 | 第18-20页 |
| ·启动子概述 | 第20-24页 |
| ·启动子的特征及分类 | 第20-21页 |
| ·启动子序列分离方法 | 第21-24页 |
| ·抗旱的分子机理研究 | 第24-27页 |
| ·与植物抗逆有关功能基因的研究 | 第24-27页 |
| ·叶片表面蜡质含量变异引起的植株抗逆性 | 第27-32页 |
| ·VLCFA合成代谢途径 | 第27-29页 |
| ·VLFAC衍生物合成途径 | 第29-30页 |
| ·蜡质与植物抗逆性 | 第30-32页 |
| ·研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-53页 |
| ·实验材料 | 第33-34页 |
| ·BnLAS基因克隆及过表达载体构建 | 第34-39页 |
| ·BnLAS基因克隆 | 第34-37页 |
| ·BnLAS基因的生物信息学分析 | 第37页 |
| ·BnLAS载体的构建 | 第37-38页 |
| ·过表达载体转化到根癌农杆菌 | 第38-39页 |
| ·BnLAS组织特异性表达分析 | 第39-41页 |
| ·油菜不同组织材料培养 | 第39页 |
| ·植物组织RNA提取 | 第39-40页 |
| ·cDNA制备 | 第40页 |
| ·半定量RT-PCR反应 | 第40页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第40-41页 |
| ·BnLAS基因拷贝数分析 | 第41页 |
| ·BnLAS启动子克隆分析及载体构建 | 第41-42页 |
| ·BnLAS启动子及LAS启动子的克隆 | 第41页 |
| ·启动子的生物信息学分析 | 第41-42页 |
| ·启动子GUS载体的构建 | 第42页 |
| ·植物表达载体的转化 | 第42-44页 |
| ·转化植株的生长 | 第42页 |
| ·拟南芥植株的浸染 | 第42-43页 |
| ·抗性植株的筛选 | 第43页 |
| ·转基因植株的分子生物学检测 | 第43-44页 |
| ·启动子转化植株的GUS分析 | 第44页 |
| ·转基因植株分析 | 第44-47页 |
| ·转基因植株的表型考察 | 第44-45页 |
| ·转基因植株叶绿素含量分析 | 第45页 |
| ·转基因植株抗旱性分析 | 第45-46页 |
| ·蜡质合成相关基因表达分析 | 第46页 |
| ·叶绿素浸出实验 | 第46-47页 |
| ·转基因植株的细胞学观察 | 第47页 |
| ·叶片结构和气孔开度观察 | 第47页 |
| ·扫描电子显微镜(SEM)观察 | 第47页 |
| ·拟南芥LAS基因酵母文库构建 | 第47-53页 |
| ·材料的准备 | 第47-48页 |
| ·RNA制备 | 第48-49页 |
| ·感受态细胞的制备(LiAc法) | 第49-50页 |
| ·AH109小样转化 | 第50-51页 |
| ·文库转化到Y187菌系 | 第51页 |
| ·检测文库自激活,文库细胞数目及文库片断大小 | 第51页 |
| ·Mateing | 第51-52页 |
| ·pBKT7-LAS,pGADT7-LAS载体的构建 | 第52-53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-76页 |
| ·BnLAS结构与特性 | 第53-56页 |
| ·BnLAS基因同源性及结构 | 第53-55页 |
| ·BnLAS特异性表达分析 | 第55页 |
| ·BnLAS拷贝数分析 | 第55-56页 |
| ·BnLAS基因启动子的分离及分析 | 第56-60页 |
| ·BnLAS启动子的分离 | 第56-57页 |
| ·BnLAS基因启动子序列的生物信息学分析 | 第57-59页 |
| ·BnLAS启动子GUS染色 | 第59-60页 |
| ·BnLAS基因过表达转基因植株分析 | 第60-61页 |
| ·转基因植株筛选及检测 | 第60页 |
| ·Southern杂交及表达分析 | 第60-61页 |
| ·过表达植株表型分析 | 第61-67页 |
| ·过表达BnLAS植株生长速度延缓 | 第62页 |
| ·过表达BnLAS基因抑制植物发育 | 第62-65页 |
| ·过表达BnLAS对植株叶绿素含量的影响 | 第65-66页 |
| ·过表达BnLAS基因对拟南芥根的影响 | 第66-67页 |
| ·过表达BnLAS转基因植株抗旱性增强 | 第67-73页 |
| ·过表达BnLAS植株抗旱性表型鉴定 | 第67-70页 |
| ·过表达植株气孔变异 | 第70-71页 |
| ·过表达植株叶片表皮蜡质含量的改变 | 第71-73页 |
| ·拟南芥LAS基因酵母双杂交文库的构建 | 第73-76页 |
| 4 讨论 | 第76-84页 |
| ·BnLAS及其同源基因在甘蓝型油菜及二倍体祖先种中高度保守 | 第76-77页 |
| ·BnLAS基因与GRAS家族关系 | 第77-79页 |
| ·BnLAS基因与LAS类基因关系 | 第77-78页 |
| ·BnLAS与GRAS家族其它成员关系探讨 | 第78-79页 |
| ·过表达BnLAS基因导致抗旱性增加 | 第79-81页 |
| ·转基因植株气孔变异导致植株抗旱 | 第80页 |
| ·表皮蜡质水平改变导致植物抗旱 | 第80-81页 |
| ·BnLAS基因在育种中的应用 | 第81-82页 |
| ·进一步研究设想 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 作者简介 | 第97-98页 |
| 附录1 部分试验详细步骤 | 第98-104页 |
| 附录2 霍兰氏营养液配方 | 第104页 |