| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 SnRK1和SnRK3蛋白激酶亚家族 | 第9-11页 |
| 1.1.1 SnRK1蛋白激酶亚家族 | 第9-10页 |
| 1.1.2 SnRK3蛋白激酶亚家族 | 第10-11页 |
| 1.2 植物中的SnRK2蛋白激酶亚家族 | 第11-14页 |
| 1.2.1 SnRK2的结构 | 第11页 |
| 1.2.2 SnRK2的激酶活性及酶作用底物 | 第11-12页 |
| 1.2.3 SnRK2家族成员的生理学作用 | 第12-14页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第14-16页 |
| 2 酵母双杂交“诱饵”蛋白表达载体pGBKT7-AtSnRK2.4的构建及自激活和毒性检测 | 第16-22页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌株 | 第16页 |
| 2.1.2 载体 | 第16-17页 |
| 2.1.3 培养基及试剂配方 | 第17-18页 |
| 2.2 方法 | 第18-19页 |
| 2.2.1 pGBKT7-AtSnRK2.4的载体构建 | 第18页 |
| 2.2.2 酵母转化 | 第18-19页 |
| 2.2.3 “诱饵”基因的毒性和自激活检测 | 第19页 |
| 2.3 结果与分析 | 第19-21页 |
| 2.3.1 pGBKT7-AtSnRK2.4表达载体的酶切鉴定 | 第19-20页 |
| 2.3.2 “诱饵”蛋白表达载体的毒性和自激活检测 | 第20-21页 |
| 2.4 本章小结 | 第21-22页 |
| 3 AtSnRK2.4蛋白的互作蛋白的筛选及酵母双杂交验证 | 第22-29页 |
| 3.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 3.1.1 菌株 | 第22页 |
| 3.1.2 载体 | 第22页 |
| 3.1.3 培养基及其试剂配方 | 第22-23页 |
| 3.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 3.2.1 拟南芥的cDNA文库的融合和筛选 | 第23页 |
| 3.2.2 提取酵母细胞的DNA及鉴定 | 第23-24页 |
| 3.2.3 转化大肠杆菌JM109及鉴定 | 第24页 |
| 3.2.4 测序及序列分析 | 第24页 |
| 3.2.5 共转化再次验证 | 第24-25页 |
| 3.3 结果与分析 | 第25-28页 |
| 3.3.1 融合率 | 第25页 |
| 3.3.2 拟南芥的cDNA文库筛选结果 | 第25页 |
| 3.3.3 测序结果及序列分析 | 第25-27页 |
| 3.3.4 共转化验证 | 第27-28页 |
| 3.4 本章小结 | 第28-29页 |
| 4 GST Pull down和双分子荧光互补试验(BiFC)验证AtSnRK2.4与2-10蛋白之间的相互作用 | 第29-47页 |
| 4.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 4.1.1 菌株 | 第29页 |
| 4.1.2 载体 | 第29页 |
| 4.1.3 主要试剂及配制 | 第29-30页 |
| 4.2 实验方法 | 第30-36页 |
| 4.2.1 pGEX-6p-3-AtSnRK2.4的载体构建 | 第30-31页 |
| 4.2.2 GST-AtSnRK2.4融合蛋白的小量诱导表达 | 第31页 |
| 4.2.3 GST-AtSnRK2.4融合蛋白的大量诱导表达及纯化 | 第31页 |
| 4.2.4 GST-AtSnRK2.4融合蛋白的自磷酸化作用检测 | 第31-32页 |
| 4.2.5 pQE30-2-10的载体构建 | 第32页 |
| 4.2.6 pQE30-2-10融合蛋白的小量诱导表达 | 第32页 |
| 4.2.7 His-2-10融合蛋白的大量诱导表达和纯化 | 第32-33页 |
| 4.2.8 体外Pull-down验证蛋白之间的相互作用 | 第33-34页 |
| 4.2.9 pBS-35S: AtSnRK2.4-VN154的载体构建 | 第34页 |
| 4.2.10 pBS-35S: 2-10-VC80的载体构建 | 第34-35页 |
| 4.2.11 pBI121-AtSnRK2.4-GFP的载体构建 | 第35页 |
| 4.2.12 pB1121-2-10-GFP的载体构建 | 第35页 |
| 4.2.13 基因枪法将质粒转化到洋葱表皮中 | 第35-36页 |
| 4.3 结果与分析 | 第36-45页 |
| 4.3.1 pGEX-6p-3-AtSnRK2.4的酶切鉴定 | 第36页 |
| 4.3.2 GST-AtSnRK2.4融合蛋白的小量诱导表达 | 第36-37页 |
| 4.3.3 GST-AtSnRK2.4融合蛋白的大量诱导表达及纯化 | 第37-38页 |
| 4.3.4 GST-AtSnRK2.4融合蛋白的自磷酸化作用检测 | 第38页 |
| 4.3.5 pQE30-2-10的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 4.3.6 His-2-10融合蛋白的小量诱导表达 | 第39-40页 |
| 4.3.7 His-2-10融合蛋白的大量诱导表达及纯化 | 第40-41页 |
| 4.3.8 Pull-down验证蛋白之间的相互作用 | 第41-42页 |
| 4.3.9 pBS-35S:AtSnRK2.4-VN154的载体构建 | 第42页 |
| 4.3.10 pBS-35S: 2-10-VC80的载体构建 | 第42-43页 |
| 4.3.11 pB1121(MCS)-AtSnRK2.4-GFP的载体构建 | 第43页 |
| 4.3.12 pB1121(MCS)-2-10-GFP的载体构建 | 第43-44页 |
| 4.3.13 AtSnRK2.4蛋白在洋葱表皮中亚细胞定位 | 第44页 |
| 4.3.14 2-10蛋白在洋葱表皮中亚细胞定位 | 第44-45页 |
| 4.3.15 双分子荧光互补实验(BiFC)验证蛋白之间的相互作用 | 第45页 |
| 4.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 5 逆境胁迫下AtSnRK2.4基因和2-10基因的mRNA的表达特性分析 | 第47-52页 |
| 5.1 实验材料 | 第47页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第47页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第47页 |
| 5.2 实验方法 | 第47页 |
| 5.2.1 植物材料的胁迫处理 | 第47页 |
| 5.2.2 拟南芥cDNA的获得 | 第47页 |
| 5.2.3 实时定量PCR | 第47页 |
| 5.3 结果与分析 | 第47-50页 |
| 5.3.1 AtSnRK2.4在不同逆境下的特异性表达 | 第47-49页 |
| 5.3.2 2-10在不同逆境下的特异性表达 | 第49-50页 |
| 5.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 讨论 | 第52-55页 |
| 结论与展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
