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利用mRNA重编程系统高效率生成瘢痕疙瘩诱导多能性干细胞的研究

摘要第5-7页
abstract第7-8页
英文缩写索引第12-14页
第一章 绪论第14-22页
    1.1 瘢痕疙瘩概述第14-17页
    1.2 诱导多能性干细胞与其重编程方法概述第17-20页
        1.2.1 诱导多能性干细胞概述第17-18页
        1.2.2 重编程方法概述第18-20页
    1.3 本论文研究目的和实验设计第20-22页
        1.3.1 研究目的第20页
        1.3.2 实验设计第20-22页
第二章 瘢痕疙瘩患者组织与细胞鉴定第22-44页
    2.1 实验材料和试剂第22-27页
        2.1.1 组织标本信息第22页
        2.1.2 主要仪器、耗材和试剂第22-27页
    2.2 实验步骤第27-35页
        2.2.1 原代瘢痕疙瘩病人成纤维细胞的分离第27-28页
        2.2.2 瘢痕疙瘩病人成纤维细胞培养第28-30页
        2.2.3 实时荧光定量聚合酶链式反应分析(Quantitativereal-timePolymeraseChainReaction,RT-PCR)第30-33页
        2.2.4 组织免疫荧光染色第33-34页
        2.2.5 制作石蜡切片第34-35页
        2.2.6 苏木素-伊红(HE)染色第35页
        2.2.7 统计学方法第35页
    2.3 实验结果第35-40页
        2.3.1 瘢痕疙瘩组织病理HE染色第35-36页
        2.3.2 瘢痕疙瘩组织I型胶原免疫荧光第36-37页
        2.3.3 原代瘢痕疙瘩病人成纤维形态观察第37-38页
        2.3.4 成纤维特异性基因检测第38页
        2.3.5 瘢痕疙瘩特异性基因检测第38-40页
    2.4 讨论第40-44页
第三章 重编程瘢痕疙瘩患者诱导多能性干细胞第44-59页
    3.1 实验材料与试剂第44-48页
        3.1.1 主要仪器、耗材与试剂第44-48页
    3.2 实验步骤第48-53页
        3.2.1 制备MEF饲养层第48-49页
        3.2.2 制作浓缩病毒第49-50页
        3.2.3 浓缩病毒重编程第50页
        3.2.4 mRNAs重编程第50-51页
        3.2.5 iPS细胞培养第51-52页
        3.2.6 检测浓缩病毒法重编程内源性四因子表达第52页
        3.2.7 检测浓缩病毒法感染效率第52-53页
    3.3 实验结果第53-56页
        3.3.1 浓缩病毒法重编程细胞形态观察第53页
        3.3.2 浓缩病毒法重编程内源性四因子基因检测第53-54页
        3.3.3 检测浓缩病毒法感染效率第54-55页
        3.3.4 mRNAs法重编程细胞形态观察第55-56页
    3.4 讨论第56-59页
第四章 瘢痕疙瘩患者诱导多能性干细胞鉴定第59-72页
    4.1 实验材料与试剂第59-61页
        4.1.1 主要仪器、耗材与试剂第59-61页
    4.2 实验步骤第61-64页
        4.2.1 碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase,AP)染色第61页
        4.2.2 细胞免疫荧光染色第61-62页
        4.2.3 检测KD-iPSCs内源性多能性基因表达第62-63页
        4.2.4 检测KD-iPSCs成纤维基因沉默第63页
        4.2.5 KD-iPSCs形成拟胚体第63-64页
        4.2.6 畸胎瘤实验第64页
        4.2.7 统计学方法第64页
    4.3 实验结果第64-69页
        4.3.1 AP染色第64-65页
        4.3.2 多能性标志物细胞免疫荧光染色第65-66页
        4.3.3 检测KD-iPSCs内源性多能性基因表达第66-67页
        4.3.4 检测KD-iPSCs成纤维基因沉默第67页
        4.3.5 KD-iPSCs拟胚体形成第67-68页
        4.3.6 畸胎瘤实验第68-69页
    4.4 讨论第69-72页
第五章 结论与展望第72-74页
    5.1 结论第72页
    5.2 展望第72-74页
参考文献第74-81页
攻读硕士期间发表论文第81-82页
致谢第82-83页
附件第83-98页

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